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四物汤是中医临床治疗血虚证的经典方剂,在补血、活血、调经方面疗效显著。但迄今为止,四物汤补血作用的分子机理还没有完全阐明。为从分子水平上深入研究四物汤的补血作用机理,本论文在放射所致血虚证研究的工作基础上,应用蛋白质组学相关技术研究了环磷酰胺(cTX)致血虚证小鼠骨髓中蛋白质表达的改变以及四物汤给药后的影响,并在mRNA水平上对若干差异蛋白进行了验证;对四物汤抗CTX引起的骨髓细胞凋亡进行了研究;最后对放化损伤致血虚证小鼠骨髓中蛋白质差异表达的异同以及四物汤对差异表达蛋白质的影响进行了比较。
研究发现CTX造模后,小鼠骨髓细胞中有12个蛋白表达上调,3个蛋白表达下调,四物汤治疗给药能够在不同程度上逆转这些蛋白表达的改变,这些蛋白主要包括与细胞迁移和黏附有关的GDI、cofilin、封端蛋白Q1、视锥蛋白样蛋白1,与细胞凋亡相关的annexinA1和PrX-V,与细胞分化相关的carbonicanhydraseI和骨髓二级颗粒蛋白。其中cofilin、annexinA1、PrX-V和carbonicanhydraseI在mRNA水平变化规律与蛋白质水平基本一致;抗凋亡实验结果表明四物汤预防给药能够减轻CTX造模6h后骨髓细胞的凋亡,抑制caspase-3酶的活性,而不能在mRNA水平上抑制Bax的表达上调;通过应用蛋白质组学技术比较放化损伤致血虚证小鼠骨髓中蛋白的变化,发现3.5Gy60Coγ射线照射损伤骨髓细胞的分子网络,通过抑制造血生长因子信号转导,抑制基因转录,使细胞周期阻滞,影响细胞能量代谢,从而抑制骨髓细胞的生长、增殖。CTX则通过破坏细胞分子网络的信号转导抑制骨髓造血干/祖细胞迁移到造血微环境增殖,抑制造血祖细胞分化,促进细胞凋亡等途径抑制骨髓造血。四物汤对上述两种血虚证动物模型骨髓蛋白质组的改变都有不同程度的逆转。
上述结果表明:四物汤可能通过促进放化损伤小鼠骨髓造血干/祖细胞的迁移,抑制骨髓细胞凋亡,促进基因转录,改善细胞周期,促进能量代谢等途径,促进造血干/祖细胞分化、增殖,改善骨髓造血而发挥补血作用。