性发育是个体成熟并获得生殖能力的重要过程，性发育的起始受到多种因素的影响，它的调控机制依赖于多条信号通路组成的关键基因网络。本课题组前期的实验中利用小鼠染色体QTL定位已经证明了Mir-505-3p是一个能够影响性发育起始的关键基因，在GT1-7细胞中确定了Mir-505的靶基因SF2，并且Mir-505抑制 SF2的表达，而与性发育相关的GnRH、Kiss1、Gpr54等基因也受到这两个基因的调控。为了研究Mir-505和SF2对性发育相关基因的调控机制，已经构建过表达Mir-505基因的GT1-7细胞（pGT1-7细胞系）以及敲低SF2基因GT1-7细胞（shRNA-SF2-GT1-7细胞系）。针对野生型GT1-7细胞进行anti-SF2的免疫共沉淀实验以及pGT1-7、GT1-7细胞的表达谱芯片检测，均检测到核糖体蛋白mRNA的富集倍数和表达水平改变。这些结果说明这些核糖体蛋白mRNA与SF2可能是相互作用的，并且它们在细胞中的表达受到SF2调控。但是，细胞裂解实验过程中，会产生大量非特异性蛋白-RNA相互作用，在免疫共沉淀实验中被检测到。因此，这些核糖体蛋白mRNA与SF2蛋白之间的特异性相互作用的真实性还有待进一步验证。
　　基于上述研究背景，为了探究直接干扰SF2表达后GT1-7细胞表达谱的变化，并与过表达Mir-505产生的表达谱差异做对比，对已构建成功的两株细胞shRNA-SF2-GT1-7和pGT1-7进行表达谱芯片检测。使用野生型GT1-7细胞做对照组，得到的差异表达基因通过GO分析和KEGG pathway分析，确定SF2和Mir-505参与调控的信号通路。为了检测核糖体蛋白mRNA与SF2蛋白之间的特异性相互作用的真实性，使用携带Flag标签的SF2过表达质粒载体转染C6细胞和GT1-7细胞，利用Flag抗体做RNA免疫共沉淀实验，检测外源SF2蛋白是否在裂解过程中非特异性结合了核糖体蛋白mRNA。
　　表达谱芯片结果显示共检测到65956个基因（蛋白编码基因35.5%，其他65.5%），经过TAC软件筛选表达水平变化1.5倍以上的基因，shRNA-SF2-GT1-7细胞中有7450个基因上调，5491个基因发生下调；pGT1-7细胞中共有6743个基因表达改变1.5倍以上，2599个基因上调，4144个基因发生下调。两种细胞的差异基因参与的生物过程主要都是大分子、有机氮等代谢过程，当然也有响应刺激的重要生理过程。差异基因所处的细胞空间位置大多是细胞器、细胞膜上，分子功能也主要集中在各种分子的结合功能和部分的激活活性。对差异基因的KEGG pathway分析可知，两种情况下被富集到的信号通路中，都出现了与性发育相关的MAPK信号通路、 PI3K-Akt 信号通路、AMPK信号通路、 GnRH信号通路、 p53信号通路和GABA能突触信号通路。使用Real-time PCR验证芯片的结果，候选基因变化趋势与芯片一致，证明结果可靠。
　　Flag-SF2过表达质粒（PLV-SF2）经过重新测序纯化后，转染C6细胞，用anti-flag进行RIP实验，抽提RNA进行Real-time PCR检测大鼠核糖体mRNA确实能够被外源的SF2蛋白结合，在与GT1-7细胞混合裂解时存在非特异结合Flag-SF2的可能。同时培养GT1-7细胞和C6细胞，GT1-7转染PLV-SF2质粒后，与C6细胞按照1：0、1：1、1：3、1：5细胞量比例混合裂解进行RIP实验，抽提RNA进行Real-time PCR检测，结果显示核糖体mRNA Rpl37a、Rpsa、Rpl5的富集倍数虽然并没有规律可循，但与阳性对照SF2变化趋势一致，证明它们与SF2蛋白的结合是特异性的。
　　综上所述，Mir-505和SF2影响几个性发育相关的信号通路形成关键的基因网络，共同对性发育起始进行调控。而且我们推测SF2与核糖体mRNA存在特异性相互作用，并调控这些转录本的表达水平，进而影响下游性发育相关基因的表达，为后续研究性发育分子机制提供新的思路。