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高致病性猪繁殖与呼吸综合征(Highly Pathogenetic Porcine Reproductive andRespiratory Syndrome Virus，HP-PRRSV)是PRRSV经过突变形成的具有更强致病性的毒株，能够引起猪的高热症状，怀孕母猪发生流产、早产、死胎等繁殖障碍，新生仔猪和育肥猪出现呼吸道疾病且生长缓慢。病毒或细菌等病原微生物与巨噬细胞表面的受体结合以后，与受体发生相互作用，并刺激巨噬细胞等分泌Ⅰ型干扰素(interferon，IFN)和抗病毒细胞因子，其中IFN-beta(IFN-β)是在病毒感染过程中具有重要作用的Ⅰ型IFN的成员之一。但是某些病毒或细菌被巨噬细胞吞噬后不仅不被降解，反而抑制宿主分泌IFN-β等天然免疫应答反应，在巨噬细胞等免疫细胞中感染和增殖，HP-PRRSV就是典型的代表。HP-PRRSV感染抑制宿主的Ⅰ型IFN介导的天然免疫应答反应，例如抑制IFN-β的表达，然而HP-PRRSV对宿主的天然免疫应答反应的抑制（如IFN-β的表达）及其机理还不十分清楚。 本文主要是通过分析MARC-145和猪肺泡巨噬细胞(Porcine alveolarmacrophages，PAM)免疫调控通路RIG-Ⅰ中重要基因IRF3、CBP等在HP-PRRSV感染前后表达水平及其定位等特征，探讨PRRSV受体基因变异对PRRSV感染的影响，研究HP-PRRSV抑制宿主的IFN-β表达的机制。主要结果如下: (1) HP-PRRSV感染抑制MARC-145细胞中的IFN-β的mRNA表达水平。感染(+HP-PRRSV)的MARC-145细胞中的IFN-β的表达量在检测的5个时间点(1hpi,12 hpi,24 hpi,36 hpi,48 hpi)均低于非感染的对照组(-HP-PRRSV)细胞的表达，同时也发现感染(+HP-PRRSV)和非感染的对照组（-HP-PRRSV）中的IFN-β的表达量非常微弱，无法有效的反映其变化趋势和不利于后期研究。为了更有效地开展研究，利用常用的IFN的刺激剂Poly(I∶C)处理MARC-145细胞后，IFN-β的表达量显著增加。然而，Poly(I∶C)刺激和提高的IFN-β的表达水平同样被HP-PRRSV显著抑制，而且在MARC-145细胞(Poly(I∶C)+HP-PRRSV)中IFN-β的表达量变化趋势与感染的(+HP-PRRSV) MARC-145细胞中的相似。因此，采用Poly(I∶C)处理的MARC-145细胞作为对照组，Poly(I∶C)和HP-PRRSV处理的MARC-145细胞作为试验组开展后续研究。试验组(Poly(I∶C)+HP-PRRSV）MARC-145细胞的IFN-β的表达量显著低于对照组(Poly(I∶C))。因此后期的试验侧重于研究HP-PRRSV对IFN-β表达的抑制机理。 (2) HP-PRRSV感染抑制MARC-145细胞中的IFN-β蛋白表达量。检测了试验组(Poly(I∶C)+HP-PRRSV)和对照组(Poly(I∶C))MARC-145细胞的IFN-β的蛋白表达量，结果和(1)中的IFN-β的mRNA表达量的趋势一致。 (3) HP-PRRSV感染抑制肺泡巨噬细胞(PAM) IFN-β的mRNA和蛋白表达。进一步检测试验组和对照组PRRSV自然感染的猪肺泡巨噬细胞PAM(Porcinealveolar macrophages)的IFN-β表达，PAM细胞中IFN-β的mRNA和蛋白表达趋势一致，而且PAM与MARC-145细胞的结果一致。 (4) HP-PRRSV感染抑制IFN-β的重要调控因子IRF3的表达。在MARC-145细胞与PAM细胞中，分别检测了试验组和对照组的IRF3的mRNA、总蛋白的表达量，试验组的表达量均低于对照组，而且IRF3的mRNA、总蛋白的表达的趋势一致。 (5)HP-PRRSV感染抑制IRF3的核转位。在MARC-145细胞与PAM细胞中，进一步检测了试验组和对照组的细胞质和细胞核的IRF3的表达量。结果表明，试验组的细胞质和细胞核的IRF3都分别低于对照组，而且试验组细胞核的IRF3蛋白非常少以致无法检测。推测HP-PRRSV感染能够减少IRF3由胞质向核转移的数量。 (6)HP-PRRSV感染抑制IRF3的磷酸化。在MARC-145细胞与PAM细胞中，检测了试验组和对照组的IRF3的磷酸化蛋白的表达量，试验组的表达量均低于对照组。推测HP-PRRSV感染通过抑制IRF3蛋白的磷酸化来抑制IRF3的核转位。 (7)HP-PRRSV感染抑制IRF3蛋白Ser396位点的磷酸化。生物信息学对IRF3的蛋白结构和功能预测表明，Ser396隐蔽在IRF3蛋白的螺旋结构和卷曲结构的交界处，而且已经有研究表明该位点对IRF3磷酸化具有重要作用，因此推测HP-PRRSV感染通过抑制Ser396位点暴露来抑制IRF3磷酸化。 (8) HP-PRRSV感染对环磷酸腺苷应答元件结合蛋白(CBP)表达没有显著影响。IRF3进入细胞核通过与CBP结合形成复合物才能与IFN-β的启动子结合，促进IFN-β表达。MARC-145细胞与PAM细胞中的感染试验组和对照组的CBP的mRNA表达量均没有明显差异，推测HP-PRRSV感染对CBP的表达没有显著影响。 (9) PAM细胞膜的PRRSV受体基因变异对HP-PRRSV感染的风险具有重要影响。HP-PRRSV感染的风险性与CD163和CD169的单核苷酸突变(SNP)相关。HP-PRRSV被细胞表面的受体识别并吞噬后才能进入细胞，CD163和CD169是两种重要的受体。Logistic回归方法对524头猪（康复猪n=298，患病猪n=95，死亡猪n=41，健康猪n=90）共6个SNPs的基因型进行感染风险分析，共得到3种基因型与HP-PRRSV感染相关，包括CD169-C1654A的AA基因型、CD169-C4175T的CT基因型、CD163-A2552G的AA基因型，比其它的基因型感染HP-PRRSV的风险小一些。说明具有吞噬功能的CD163和CD169的SNPs与感染HP-PRRSV的风险性有关。 (10)受体CD169和CD163基因的单核苷酸突变影响受体介导的吞噬功能。蛋白结构和功能预测软件分析结果表明，CD169受体的3个SNPs均能导致氨基酸的改变，而且都位于免疫球蛋白区域，影响蛋白稳定性。这3个SNPs通过改变蛋白稳定性来影响受体介导的吞噬功能。CDI63受体的2个SNPs位于结合病原体的结构域，虽然不改变氨基酸，但是通过影响密码子的偏好性进而改变翻译的蛋白的数量。另一个SNP也位于结合病原体的结构域，通过改变氨基酸影响受体的吞噬功能。 本研究初步认为HP-PRRSV通过影响IRF3二级和三级结构而降低了IRF3的磷酸化水平，IRF3蛋白的较低磷酸化水平影响和降低了IRF3进入细胞核的数量，减少了蛋白IRF3和CBP结合形成的复合物，并且减少了复合物与IFN-β启动子结合机会，从而抑制IFN-β的转录和蛋白表达，进而使HP-PRRSV抑制了宿主的免疫反应而感染侵害宿主。此外，PAM细胞膜上的PPRSV受体基因（CD163和CD169）的变异和不同基因型也影响HP-PRRSV感染风险性。