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目的:脓毒症(Sepsis)是创伤、烧伤、感染、大手术等临床急危重病人的严重并发症之一,也是诱发脓毒性休克(Septic Shock)、多器官功能障碍综合征(Multipie Organ Dysfunction Syndrome,MODS)的重要原因,其本质为不同感染性因素所致的失控性炎症反应,如细菌、真菌、病毒及其产物等均可诱发脓毒症。近年来,有关脓毒症发生规律与临床意义的研究取得了一定的进展,但脓毒症、多器官功能障碍综合征抗炎治疗的临床试验并未取得预期的临床效果,说明脓毒症根本发病环节及作用机制有待深入研究。本研究通过对外科脓毒症病儿的外周血干扰素-γ,(IFN-γ)、白介素-4(IL-4)水平监测及淋巴细胞计数的研究,了解外科脓毒症病儿机体的免疫反应状态,为临床探索免疫调控治疗提供一定的理论依据。
方法:
(1)研究对象:脓毒症组(S):选择本院外科收治的严重腹腔感染病儿30例(男20例,女10例),其中化脓性阑尾炎并腹膜炎26例,美克尔憩室炎伴腹膜炎4例,所有病儿入院后依据2005年国际儿科脓毒症会议确定的诊断标准进行评估,均确诊为脓毒症。对照组(C):选取同期查体健康同龄儿童30人,其中男22例,女8例。
(2)标本采集及检测指标:脓毒症组(S):分别于手术前(S0)和手术后第1天(S1)、第5天(S5)抽取静脉血2ml,以3500rpm的速度离心5分钟,取上清液,保存于-20℃冰箱中备用;并于同期采末梢血检测血常规。对照组(C):抽取静脉血2ml,以3500rpm的速度离心5分钟,取上清液,保存于-20℃冰箱中备用。采末梢血检测血常规。
(3)检验方法:采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定IFN-γ和IL-4浓度,操作过程严格按说明书操作,测定IFN-γ及IL-4的OD值,以OD值为纵坐标,以标准品浓度为横坐标,绘制标准曲线。根据血清样品的OD值在标准曲线上查出其浓度。采用血细胞分析仪测定末梢血白细胞及淋巴细胞计数。
(4)数据处理使用SPSS10.0分析软件,对数据进行分析。
结果:
1.脓毒症组与对照组比较,性别、年龄间差异无统计学意义,P>0.05。
2.血清IFN-γ浓度:脓毒症组手术前(10.92±2.30 pg/ml)与对照组(11.63±3.0 pg/ml)比较,差异无显著性(P>0.05);术后第1天(8.35±1.84pg/ml)与术前比较浓度下降,差异有显著性(P<0.01);术后第5天(10.30±2.38pg/ml)与术前比较,差异无显著性(P>0.05);术后第5天与对照组比较,浓度恢复到正常水平,差异无显著性(P>0.05)。
3.血清IL-4浓度:脓毒症组手术前(78.3±24.88pg/ml)与对照组(23.15±7.25pg/ml)比较浓度升高,差异有显著性(P<0.01);术后第1天(88.72±38.18pg/ml)与术前比较浓度升高,差异有显著性(P<0.01);术后第5天(34.51±16.51pg/ml)与术前比较浓度下降,差异有显著性(P<0.01);术后第5天与对照组比较浓度仍高,未恢复至正常水平,差异有显著性(P<0.01)。
4.IFN-γ/IL-4:脓毒症组手术前(0.16±0.07)与对()组(0.53±0.17)比较()直降低,差异有显著性();术后第1天(0.12±0.06)与术前比较比值降低,差异有显著性(P<0.05);术后第5天(0.37±0.19)与术前比较比值增加,差异有显著性(P<0.01);术后第5天与对照组比较比值降低,差异有显著性(P<0.01)。
5.白细胞计数:脓毒症组手术前白细胞计数(19.914±5.75x109/L)高于对照组(7.73±1.26x109/L),差异有显著性(P<0.01);术前外周血白细胞计数明显高于术后第1天(15.72±5.06×109/L)及术后第5天(9.99±3.08×109/L),差异有显著性(P<0.01);术后第5天外周血白细胞计数高于对照组,未完全恢复至正常水平,差异有显著性(P<0.01)。
6.外周血淋巴细胞计数:脓毒症组手术前外周血淋巴细胞计数(3.74±1.62×109/L)与对照组(3.69±1.05×109/L)比较,差异无显著性(P>0.05);脓毒症组外周血淋巴细胞计数术前与术后第1天(3.80±1.97×109/L)及第5天(4.03±1.89×109/L)比较,差异无显著性(P>0.05);术后第5天外周血淋巴细胞计数与对照组比较,差异无显著性(P>0.05)。
结论:
1.脓毒症病儿Th1细胞应答减弱,Th2细胞应答增强,出现Th1/Th2平衡明显向Th2偏移,表明脓毒症病儿术前细胞免疫功能下降,存在免疫抑制状态。
2.外科手术打击可以加剧Th1/Th2平衡向Th2偏移,加重免疫抑制。经积极外科治疗,机体可以逆转Th1/Th2平衡向Th2偏移,恢复正常免疫功能。
3.本试验外周血淋巴细胞计数无下降,提示在脓毒症病儿中.淋巴细胞计数不是反映机体免疫状态的敏感指标。