【摘 要】
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心血管疾病的患病死亡人数占全球死亡人数的31%以上,高脂血症则是心血管疾病发病的危险诱因,成为了全民关注的热点。高脂血症发病机制复杂,防治难,临床表现为血清甘油三酯和胆固醇水平高,且治疗时采用的药物副作用大,常给患者带来严重不适。因此,亟需开发出天然源生物活性物质来辅助治疗高脂血症。近年来,食源性生物活性肽因安全系数高,作用效果明显等优势备受关注。大量研究表明,驼血营养丰富,总蛋白质含量高,驼血蛋
【基金项目】
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内蒙古农业大学高层次人才引进科研启动项目(NDYB2018-48); 中蒙骆驼天然生物资源的收集及开发利用;国家重点研发计划项目(2020YFE0203300);
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心血管疾病的患病死亡人数占全球死亡人数的31%以上,高脂血症则是心血管疾病发病的危险诱因,成为了全民关注的热点。高脂血症发病机制复杂,防治难,临床表现为血清甘油三酯和胆固醇水平高,且治疗时采用的药物副作用大,常给患者带来严重不适。因此,亟需开发出天然源生物活性物质来辅助治疗高脂血症。近年来,食源性生物活性肽因安全系数高,作用效果明显等优势备受关注。大量研究表明,驼血营养丰富,总蛋白质含量高,驼血蛋白初级结构中加密了许多生物活性肽,具有降血糖、抗氧化等生物活性。因此,本试验旨在利用中性蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶酶解驼血蛋白,对其酶解工艺、酶解产物的胰脂肪酶抑制能力、分子量分布以及肽段序列进行比较研究,以期获得高活性的驼血源降血脂生物活性肽。(1)不同的蛋白酶水解驼血蛋白所得最优酶解工艺不同。受酶切位点的影响,酶解产物的胰脂肪酶抑制能力也有所不同,以酶解产物的胰脂肪酶抑制率为评判指标,从7种蛋白酶中筛选出较有优势的4种蛋白酶,在各自的最佳酶解工艺条件下所得酶解产物的胰脂肪酶抑制率由高到低为:风味蛋白酶酶解产物(FW)>木瓜蛋白酶酶解产物(MG)>中性蛋白酶酶解产物(ZX)>碱性蛋白酶酶解产物(JX)。风味蛋白酶的最优酶解工艺为酶用量3%,酶解时间3 h,酶解温度65℃,酶解pH7.5。SDS-PAGE凝胶电泳显示驼血大分子蛋白已被有效酶解,酶解效果良好。FW的MALDI-TOF-MS图谱洗脱峰最多,FW中的小分子肽更多。(2)肽序列分析显示,ZX、FW、MG和JX中相同肽段有144种,差异性肽段分别有406、1973、22和167种。可以看出,不同蛋白酶的酶解产物肽段种类丰富,主要来源于血红蛋白、血清白蛋白、血影蛋白和纤维原蛋白。其中,血红蛋白被四种蛋白酶分解的最多,是主要的蛋白质分解来源。(3)风味蛋白酶酶解产物层析后的组分2(FW2)的胰脂肪酶抑制率达51.72%,显著高于组分1(FW1)和组分3(FW3)(P<0.05),从中筛选出107条具有潜在生物活性的肽段,分子量主要集中在400~1400 Da。Pepsite 2结果显示,PFF、FPMF、FPAF和FPHF与胰脂肪酶活性位点结合最为显著。经人工合成验证得出:单一肽胰脂肪酶抑制能力由强到弱依次为PFF>FPMF>FPAF>FPHF。混合肽的胰脂肪酶抑制能力最强,显著高于4种单一肽(P<0.05)。与BIOPEP、Peptide DB、Swe Pep和EROPMoscow对比,无搜索记录,说明本试验发现了新的生物活性肽。
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