【摘 要】
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目的探究拉坦前列素对人表皮黑素细胞增殖与黑素合成功能的影响,并对其作用机制进行初步探索。方法提取人原代表皮黑素细胞并培养,用不同浓度(10-5、10-6、10-7mol/L)的拉坦前列素处理细胞48小时。采用CCK8法检测黑素细胞增殖水平;NaOH溶解法检测黑素合成水平;Masson-Fontana染色法观察细胞合成黑素颗粒数量及分布;多巴比色法检测酪氨酸酶活性;Western印迹法及荧光定量PC
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目的探究拉坦前列素对人表皮黑素细胞增殖与黑素合成功能的影响,并对其作用机制进行初步探索。方法提取人原代表皮黑素细胞并培养,用不同浓度(10-5、10-6、10-7mol/L)的拉坦前列素处理细胞48小时。采用CCK8法检测黑素细胞增殖水平;NaOH溶解法检测黑素合成水平;Masson-Fontana染色法观察细胞合成黑素颗粒数量及分布;多巴比色法检测酪氨酸酶活性;Western印迹法及荧光定量PCR分别检测黑素合成相关基因小眼畸形相关转录因子(MITF)、酪氨酸酶(TYR)、酪氨酸酶相关蛋白1(TYRP1)蛋白及mRNA的表达;以及采用Western印迹法检测经拉坦前列素处理前后的人表皮黑素细胞表达MAPK途径相关蛋白的水平。结果(1)10-6、10-55 mol/L拉坦前列素组黑素细胞的增殖水平与对照组相比更高,黑素合成亦显著增加。10-7mol/L拉坦前列素组较对照组的黑素细胞增殖水平、黑素合成差异均无统计学意义。Masson-Fontana法染色后显示,经拉坦前列素处理的黑素细胞树突上的黑素颗粒数量均较对照组更多,且黑素颗粒的颜色更深。(2)10-6、10-55 mol/L拉坦前列素组酪氨酸酶活性与对照组相比更高。一定浓度的拉坦前列素可增加MITF、TYR、TYRP1 mRNA的表达,其中MITF mRNA的表达随拉坦前列素浓度的升高而增加,而TYR和TYRP1的mRNA的表达均在10-66 mol/L拉坦前列素组达峰。同样的,MITF、TYR、TYRP1蛋白的表达也受拉坦前列素的影响,其中,各浓度拉坦前列素均能促进MITF蛋白的表达,而TYR、TYRP1蛋白的表达亦在10-66 mol/L拉坦前列素组升高最明显。(3)经拉坦前列素处理的人表皮黑素细胞上的p-ERK表达降低,而在给予拉坦前列素处理的基础上添加ERK激动剂干预后,细胞酪氨酸酶活性、黑素合成功能及MITF、TYR、TYRP1基因mRNA和蛋白的表达均较单予拉坦前列素处理时降低。结论拉坦前列素对人表皮黑素细胞的增殖水平、酪氨酸酶活性以及黑素合成功能有一定的促进作用,这种作用可能经由MAPK/ERK-MITF-TYR途径调控。
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