鹤顶兰(Phaius tankervilleae)为兰科鹤顶兰属植物,多年生草本,叶长椭圆状披针形,花形优美,色泽鲜艳,是优良的野生热带兰之一。鹤顶兰花朵下垂和属间杂交不易等缺点制约着鹤顶兰的进一步推广。倍性育种是种质资源创新的重要途径之一,将鹤顶兰染色体进行加倍有望克服上述缺点。本研究以鹤顶兰为材料,利用化学诱变与组织培养相结合的技术,研究了秋水仙素诱导鹤顶兰染色体加倍的技术体系,并探讨了嵌合体的分离方法。主要结果如下：1.建立了鹤顶兰的一次成苗离体再生体系。以无菌苗的假鳞茎与茎尖为外植体,诱导类原球茎的最适培养基为花宝一号+2.0mg/LBA+0.2mg/LNAA+椰子水100mL/L+活性炭2g/L+卡拉胶8g/L+蔗糖20g/L,诱导后无需转接于生根培养基中,再生植株生根率达100%,移栽成活率可达98.3%。一次成苗离体再生体系有效的减少了组织培养中多次转接造成的污染,简化了鹤顶兰生产的程序,节约成本,可缩短生产的周期。2.构建了秋水仙素诱导鹤顶兰多倍体的离体诱导体系。分别采用田间诱导、离体诱导(混培法与浸泡法)进行多倍体诱导,以浸泡法效果最好。用浸泡法处理原球茎,当秋水仙素浓度为0.02%,处理时间6d时,变异率可达22.5%,获得纯合四倍体植株3株,嵌合体107株,丰富了鹤顶兰的种质资源,为兰科植物多倍体诱导提供参考。纯合四倍体小苗表现出植株粗壮、叶片肥厚、生长缓慢的特性。3.构建了适合鹤顶兰嵌合体分离纯化的方法。将鹤顶兰嵌合体植株切除根部后接种于一次成苗的半固体培养基中进行嵌合体分离,诱导出类原球茎并发育成苗,分离出2株纯合四倍体。嵌合体的成功分离提高了多倍体诱导的效率。