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RGMb作为BMP辅助受体,参与BMP的功能调控。本论文应用IHC、real-timePCR和western blotting方法分析RGMb在大鼠子宫和卵巢中的表达,同时分析了其在湖羊公羊部分组织器官中的表达,为研究RGMb在生殖过程中的作用机制提供试验依据,对进一步了解RGMb参与性腺功能调控具有一定的意义。主要内容如下：1 RGMb在大鼠发情周期子宫和卵巢中的定位与表达为了研究RGMb在大鼠发情周期子宫和卵巢中的定位与表达,本研究利用阴道涂片法确定大鼠发情周期,real-time PCR结果显示子宫RGMb mRNA在大鼠发情后期和间期的表达水平显著高于发情前期和发情期(P<0.05)。Western blotting结果显示子宫RGMb蛋白在发情期显著低于其他三个时期(P<0.05)。免疫组化结果发现RGMb蛋白主要定位于子宫内膜腔上皮和腺上皮细胞上。在卵巢中,RGMb mRNA和蛋白水平在整个发情周期中并没有显著变化,RGMb蛋白主要在各级卵泡的卵母细胞中表达,在黄体中也存在弱表达。由上述结果可知,RGMb可能参与子宫稳态,卵泡发育和黄体功能的调节。2外源性激素对大鼠子宫RGMb基因表达的影响为了研究雌激素和孕激素对子宫RGMb基因的调控作用,30只性成熟前大鼠随机分为6组(n=5),分别注射芝麻油、E2、P4、E2+P4、E2+ICI 182780和P4+RU486。结果发现类固醇激素促进子宫增重。real-time PCR结果显示,E2处理组RGMb基因的表达水平有低于对照组的趋势,而P4处理组水平有高于处理组的趋势,两者协同处理则可显著显抑制RGMb基因的表达(P<0.05),且E2组的表达水平显著低于P4组(P<0.05),雌激素受体拮抗剂组(ICI 182780)显著低于对照组和雌激素(P<0.05),孕激素受体拮抗剂组(RU486)显著低于孕激素组(P<0.05)。上述结果表明,雌激素在孕激素的协同作用下抑制RGMb基因的表达,P4促进RGMb基因的表达。3 RGMb基因在湖羊组织中的表达研究先前研究显示RGMb基因在啮齿动物中存在广泛表达。然而,有关RGMb基因在湖羊等家畜中组织表达的研究却未见报道。本试验旨在运用RT-PCR技术从湖羊的总RNA中克隆RGMb基因的部分cDNA序列,同时检测RGMb基因在雄性湖羊心、肝、肾、睾丸和附睾(头、体、尾)组织中的表达水平。结果显示：克隆出的RGMb基因部分cDNA序列片段长为895bp,与小鼠、大鼠、人类和猪RGMb mRNA序列同源性分别为84%,84%,86%和88%,而与牛、藏羚羊RGMb mRNA序列同源性则分别高达95%和98%。RGMb基因在湖羊肝组织中表达最低,而在生殖组织(附睾)中表达量显著高于心、肝、肾组织(P<0.05)。本研究为后续具体探究RGMb在湖羊生殖中的调控机制以及湖羊的生产利用提供了理论基础。