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背景和目的降低循环中低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol, LDL-C)水平有助于减低冠心病(coronary heart disease, CHD)发病风险的观点已得到广泛的认同。但是,不断积累的临床证据表明通过降低LDL来治疗和预防CHD也存在着一定的风险。大型多中心随机研究发现,血清中高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol, HDL-C)水平与心血管疾病发生率呈负相关。HDL本身也具备抗氧化、抗增殖、抗炎症反应的作用。因此,提高HDL-C有助于降低心血管疾病的发生风险。目前用于提高血清HDL-C的治疗方法仍具有一定的局限性。例如,尼克酸可适当提高血清HDL-C浓度,但却面临组织耐受性的问题。而贝特类药物对于绝大多数患者来说其调节HDL-C水平的作用都非常有限。有实验发现基于载脂蛋白A-1(apolipoprotein A-1, apo A-1)的灌注治疗可以减缓动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)的发展,但目前尚无进展。他汀类药物(statins)作为羟甲基戊二酰辅酶A (HMG-CoA)还原酶抑制剂,有研究显示此类药物通过竞争性抑制内源性胆固醇合成限速酶(HMG-CoA)还原酶,阻断细胞内羟甲戊酸代谢途径,使细胞内胆固醇合成减少,从而反馈性刺激细胞膜表面(主要为肝细胞)低密度脂蛋白(low density lipoprotein, LDL)受体数量和活性增加,从而增强LDL-C的摄取和分解代谢。另外更为重要的是,他汀类药物同时还能够适度提高循环中HDL-C的水平。他汀类药物改善HDL-C水平的作用机理目前还有待进一步研究。内皮脂酶(endothelial lipase, EL)是近年来新发现的甘油三酯脂肪酶家族的一个新成员。EL主要表现为磷脂酶活性,可通过非酶桥连与酶解作用参与调节HDL-C水平,并成为HDL-C水平的主要决定因素。EL表达受多种因素共同调节。肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白细胞介素-β (interleukin-β)、生物机械力都能够诱导人内皮细胞EL mRNA表达。本研究选择冠心病患者,观察应用他汀类药物阿托伐他汀(atorvastatin, Lipitor, Pfizer)治疗者与非阿托伐他汀治疗者其脂质水平、内皮酯酶EL mRNA表达及内皮酯酶蛋白表达的差异,对与动脉粥样硬化关系密切的炎性因子IL-1(interleukin, IL-1)、IL-6(interleukin, IL-6)、TNF-α和其它因素与EL mRNA和EL蛋白表达之间的关系进行了单因素分析和多因素分析,并与对照组比较,探讨内皮酯酶与冠心病之间的关系及阿托伐他汀是否可能通过调节血浆EL水平途径参与调节HDL-C水平及其代谢过程,从而为他汀类药物在冠心病治疗的临床应用提供更多理论依据和临床实践依据。研究对象和方法1.研究对象选择经冠状动脉造影确诊的冠心病患者115例及非冠心病且无其它慢性病者58例。冠心病者分为二组：非他汀治疗组(non-atorvastatin treatment group,):67例,入组前均未曾应用过他汀类及其它调脂类药物治疗。阿托伐他汀治疗组(atorvastatin treatment group,):48例,入组前均除其它治疗外均曾应用阿托伐他汀10-20mg每日一次治疗3-6个月。58例非冠心病者纳入对照组(control group)。2.方法2.1血标本采集所有研究对象均于入院次日采集空腹自凝血及于冠状动脉造影时采集肝素化血样,分别经高速离心后取血清与血浆-80℃留置备用。2.2生化指标检测使用全自动生化检测仪检测自凝血血样血清胆固醇((total cholesterol, TC)、甘油三酯(triglyceride, TG)、载脂蛋白A1(apo-A1)、载脂蛋白B (apo-B)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和C反应蛋白(c-reactive protein, CRP)含量。2.3荧光定量PCR检测血浆IL-1、IL-6、TNF-α及内皮脂酶mRNA表达：(1)设计合成IL-1、IL-6、TNF-α及EL mRNA引物。(2)完成血浆总RNA的提取和cDNA合成。(3)采用荧光定量PCR进行检测2.4Western Blot测定各组血浆EL蛋白的表达将留置备用的血浆,使用裂解液提取总蛋白,测定提取蛋白浓度。采用SDS-PAGE凝胶电泳半定量检测血浆中EL蛋白表达。2.5对上述实验数据进行统计学分析结果1.67例非他汀治疗组脂质水平分别为：TC6.75±0.41.TG2.98±0.66.apo-B3.23±0.41、LDL-C4.93±1.09;阿托伐他汀降脂治疗组脂质水平分别为：TC4.86±0.32、TG1.52±0.59、apo-B1.21±0.22、LDL-C2.88±0.77。对照组脂质水平分别为：TC4.17±0.27、TG1.70±0.63、apo-B0.87±0.11、LDL-C3.11±0.79。比较各组血清脂质指标可见,阿托伐他汀干预治疗组冠心病患者平均血清TC、TG、 apo-B、LDL-C含量较非他汀治疗组患者和对照组人群下降,具有显著性差异(P<0.05)。2.非他汀治疗组EL mRNA表达量为79.50±5.28；阿托伐他汀治疗组EL mRNA表达量为60.22±4.36；对照组EL mRNA表达量为59.66±4.96,；比较各组血浆ELmRNA表达水平可见,阿托伐他汀干预治疗组EL mRNA表达水平明显低于非他汀治疗组(P<0.05)。采用Western Blot方法检测各组血浆游离EL蛋白表达,结果显示,非他汀治疗组血浆游离EL蛋白表达量为0.971±0.069,阿托伐他汀干预治疗组血浆游离EL蛋白表达量为：0.763±0.052,对照组血浆游离EL蛋白表达量为：0.796±0.038。阿托伐他汀干预治疗组冠心病患者EL表达(EL mRNA和血浆游离EL)较非他汀治疗组患者患者表达相应下降,具有显著性差异(p<0.05)。3.非他汀治疗组脂质水平apo-A1和HDL-C分别为:apo-A11.14±0.06、HDL-C1.20±0.28、LDL-C4.93±1.09;阿托伐他汀降脂治疗组apo-A1和HDL-C分别为：apo-A12.89±0.53、HDL-C1.77±0.61。对照组apo-A1和HDL-C水平分别为：apo-A11.07±0.19、HDL-C1.38±0.33。apo-A1、HDL-C血清含量在阿托伐他汀干预治疗组中较其它两组升高,具有显著性差异(p<0.05)。4.非他汀治疗组TNF-α、IL-1、IL-6mRNA表达量分别为1.82±0.31、3.31±0.89和2.31±0.69。该组反映机体炎症水平的血浆C反应蛋白为16.13±3.18；阿托伐他汀降脂治疗组TNF-α、IL-1、IL-6mRNA表达量分别为1.13±0.09、2.34±0.71和1.41±0.29,C反应蛋白8.72±3.36；对照组TNF-α、IL-1、IL-6mRNA表达量分别为1.19±0.11、2.38±0.69和1.38±0.21,C反应蛋白为8.26±3.26。比较各组炎症因子表达情况显示,阿托伐他汀干预治疗组患者血浆TNF-α、IL-1、 IL-6mRNA、CRP水平均明显低于非他汀治疗组(P<0.05)。5.对全部115例患者血浆EL构成潜在影响的因素进行单因素分析,结果发现：合并糖尿病、未接受阿托伐他汀治疗、IL-1,IL-6及TNF-α mRNA高表达与血浆EL高水平表达显著相关(P<0.05)。性别、年龄、吸烟状况、体质指数等因素对血浆EL高表达无显著相关性(P>0.05)。多因素分析显示,阿托伐他汀治疗与否、IL-1/6和TNF-α mRNA水平构成影响血浆EL表达的独立因素。结论1.阿托伐他汀可干预异常血脂,显著降低血浆TC、TG、apo-B、LDL-C并提高HDL-C和apo-A1水平。2.阿托伐他汀能够显著降低C反应蛋白以及循环中炎症因子IL-1/6和TNF-α的表达。3.阿托伐他汀可明显抑制ELmRNA合成及游离EL的表达量。4.单因素分析结果显示：合并糖尿病、未接受阿托伐他汀治疗、IL-1, IL-6及TNF-α mRNA高表达与血浆EL高水平表达显著相关。多因素分析,结果显示是否接受阿托伐他汀治疗、IL-1/6及TNF-α mRNA表达水平是影响血浆EL水平的独立风险因素。