【摘 要】
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猪伪狂犬病由伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起,仔猪感染死亡率高,母猪感染可导致繁殖功能障碍,成年猪感染PRV可引起呼吸和神经系统疾病。它是猪病中最具危害的传染病之一,给全世界的养猪业带来了巨大的经济损失。PRV进入易感性细胞需要由细胞受体或因子的协同相互作用介导。PRV感染过程中至少有5种病毒糖蛋白(gB,gC,gD,gH和gL)参与其中,并且已将细胞硫酸肝素(HS)
【基金项目】
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十三五国家重点研发计划(编号:2016YFD0500706,2017YFD0501006);
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猪伪狂犬病由伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起,仔猪感染死亡率高,母猪感染可导致繁殖功能障碍,成年猪感染PRV可引起呼吸和神经系统疾病。它是猪病中最具危害的传染病之一,给全世界的养猪业带来了巨大的经济损失。PRV进入易感性细胞需要由细胞受体或因子的协同相互作用介导。PRV感染过程中至少有5种病毒糖蛋白(gB,gC,gD,gH和gL)参与其中,并且已将细胞硫酸肝素(HS),nectin-1,nectin-2和CD155鉴定为PRV进入受体。MYH9,非肌肉肌球蛋白重链IIA,参与许多生物学过程,包括细胞迁移、粘附、分裂、极性和形态发生。它也被确定为HSV-1,EBV,SFTSV和PRRSV的功能性受体。HSV-1和PRV同属于α-疱疹病毒亚科,在基因组序列、结构、物理和化学性质上具有高度相似性。但是,对MYH9参与PRV感染过程的详细机制了解不足。在这项研究中,我们明确了MYH9与PRV的gH和gL相互作用,并且是PRV感染的重要因素。主要内容和结果如下:1.为研究MYH9在PRV感染后在细胞中的表达和分布,我们将PRV在4℃吸附PK-15细胞2 h,然后转移至37℃,并使用IFA分析了MYH9在细胞中的分布。为了评估细胞表面表达的MYH9,我们在PRV感染后提取了细胞膜蛋白。结果表明,PRV感染后,细胞质中的MYH9明显重新分布在细胞膜上,而MYH9的总量没有明显变化。2.为鉴定MYH9和PRV糖蛋白之间的相互作用,我们使用带有FLAG标签的病毒糖蛋白(gB,gC,gD,gH和gL)以及带有HA标签的MYH9 C端(命名为PRA)的真核表达质粒,共转染入HEK 293T细胞后,采用免疫共沉淀法检测MYH9相互作用蛋白。结果表明,PRV gC,gH和gL可以与MYH9相互作用。我们还构建了原核表达质粒p ET-28a-gC,p ET-28a-gH,p ET-28a-gL,表达并纯化了gC,gH和gL蛋白。使用CO-IP技术检测这些蛋白质与PK-15细胞中内源性MYH9之间的相互作用。结果表明,MYH9与PRV gH和gL蛋白相互作用。3.为确定PRV感染是否需要MYH9,我们使用了MYH9 ATPase抑制剂(blebbistatin),si RNAMYH9和兔抗sPRA。结果显示,blebbistatin、si RNAMYH9和兔抗sPRA能够显著抑制PRV感染,并呈剂量依赖性。此外,sPRA蛋白被用于阻断PRV感染,结果表明sPRA可以以剂量依赖的方式阻断PRV感染。以上结果初步证实MYH9在PRV感染过程中具有一定作用,为预防和治疗PRV提供了新的研究思路。
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