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免疫亲和色谱(Immunoaffinity Chromatography,IAC),与传统的样品前处理方法相比,其操作过程简便快速、选择性高、能在较小的柱床体积下完成分离过程,因而被广泛应用于样品前处理中,特别是目标组分多为痕量水平以及实际样品复杂的抗生素残留检测的前处理。本研究以达氟沙星(Danofloxacin,DAN)和恩诺沙星(Enrofloxacin,ENR)这两种氟喹诺酮类抗生素作为目标分析物,通过乳化交联法、膜乳化法制备粒径均一的壳聚糖微球,评价微球的粒径及理化性质,并将其与免疫获得的DAN、ENR多克隆抗体偶联制备IAC柱,同时对柱子的性能和应用前景进行了评价。主要研究内容和结果如下:1.采用乳化交联法制备壳聚糖微球并对单因素优化,确定壳聚糖分子量为600kD,氨基醛基摩尔比为2:1,壳聚糖浓度为2%,水相油相比为1/8,搅拌速率为400rpm制备壳聚糖微球,优化的微球平均粒径为124μm,Span值为1.08;采用膜乳化法以分子量为100kD的壳聚糖为原料制备得到的微球平均粒径为62.9μm,Span值1.96;市售Sepharose 4B平均粒径为86.6μm,Span值1.50;2.采用免疫原DAN-BSA免疫新西兰白兔,纯化得到DAN多克隆抗体,用icELSIA法测得纯化后多克隆抗体IC50值为4.6ng/mL,与CIP、ENR、NOR和OFL的交叉反应率均小于0.5%;纯化ENR抗血清得到的ENR多克隆抗体IC50值为8.0ng/mL,与CIP、DAN、NOR和OFL的交叉反应率均小于0.8%,两者都有较好的亲和性和特异性,达到了制备免疫亲和柱的需求;3.所制备的以壳聚糖为载体DAN多克隆抗体IAC柱结合DAN的最大容量为3.9μg/mL凝胶,IAC柱的平均回收率为87.91%,IAC柱之间的变异系数(CV)为7.98%;所制备的以Sepharose 4B为载体DAN多克隆抗体IAC柱结合DAN的最大容量为2.3μg/mL凝胶,IAC柱的平均回收率为95.67%,IAC柱之间的变异系数(CV)为4.10%;所制备的以壳聚糖为载体ENR多克隆抗体IAC柱结合ENR的最大容量为4.1μg/m L凝胶,IAC柱的平均回收率为94.44%,IAC柱之间的变异系数(CV)为4.26%;所制备的以Sepharose 4B为载体ENR多克隆抗体IAC柱结合ENR的最大容量为2.5μg/mL凝胶,IAC柱的平均回收率为98.95%,IAC柱之间的变异系数(CV)为2.98%;4.将所制备的IAC柱配合HPLC用于牛奶样品中DAN、ENR的加标回收检测(添加水平为25、50ng/mL),其中以壳聚糖为载体DAN多克隆抗体IAC柱的回收率为83.82%~98.76%,CV值小于4.05%;以Sepharose 4B为载体DAN多克隆抗体IAC柱的加标回收率为90.24%~100.10%,CV值小于5.89%;将所制备的以壳聚糖为载体ENR多克隆抗体IAC柱的回收率为89.96%~99.40%,CV值小于5.02%;以Sepharose 4B为载体ENR多克隆抗体IAC柱的加标回收率为96.52%~99.84%,CV值小于1.93%。