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目的研究镉是否通过内质网应激激活PERK-eIF2α-ATF4通路致卵巢颗粒细胞损伤及其可能的调控机制。为进一步探讨镉致卵巢颗粒细胞损伤及其调控机制提供科学依据。方法一、镉暴露大鼠卵巢颗粒细胞BIP、p-PERK、p-eIF2α的表达取21日龄50-60g雌性SD大鼠的卵巢颗粒细胞体外稳定培养36 h后,5μM、10μM、20μM CdCl2染毒,同时设置阴性对照组(不含CdCl2的培养基)。12 h后提取总RNA和总蛋白,分别运用RT-PCR和Western Blot检测BIP、p-PERK及p-eIF2α表达变化。二、BIP基因敲低后镉暴露人卵巢颗粒肿瘤细胞BIP、p-PERK及p-eIF2α的表达使用人卵巢肿瘤颗粒细胞系作为工具细胞,使用RNA干扰技术构建BIP基因敲低细胞株COV434-BIPshRNA,实验分组设置为0μM的CdCl2处理COV434组;20μM的CdCl2处理COV434组;20μM的CdCl2处理COV434-Control组;20μM的CdCl2处理COV434-BIPshRNA转染组,12 h后提取总RNA和总蛋白,分别采用RT-PCR和Western Blot检测BIP、p-PERK及p-eIF2α表达变化。三、镉暴露大鼠卵巢颗粒细胞BIP基因表达相关的microRNA改变通过miRNA芯片技术筛选镉暴露(10μM)卵巢颗粒细胞差异表达miRNA,(Fold change≥1.33或≤0.77,且P<0.05),使用在线数据库“http://zmf.umm.uni-heidelberg.de/apps/zmf/mirwalk/predicted mirna gene.php”预测并通过数据库miRDB、microRNA.org、TargetScan比较miRNA分值,选定并检测与内质网应激有关的miRNA;取21日龄50-60g雌性SD大鼠卵巢颗粒细胞体外稳定培养36 h后,5μM、10μM、20μM CdCl2染毒,同时设置阴性对照组(不含CdCl2的培养基)。12 h后提取总RNA,采用RT-PCR检测rno-miR-199a-5p、rno-mi R-181a-5p、rno-miR-495、rno-miR-30b-3p及rno-miR-150-5p表达。结果一、镉暴露大鼠卵巢颗粒细胞BIP、p-PERK、p-eIF2α的表达(1)与对照组0μM CdCl2相比,5μM CdCl2染毒组BIP mRNA表达下调,10μM CdCl2染毒组和20μM CdCl2染毒组,BIP mRNA和蛋白表达上调,差异均具有统计学意义(P<0.05);(2)与对照组0μM CdCl2相比,5μM CdCl2染毒组、10μM CdCl2染毒组、20μM CdCl2染毒组中p-PERK蛋白表达上调,差异均具有统计学意义(P<0.05);(3)与对照组0μM CdCl2相比,5μM CdCl2染毒组、10μM CdCl2染毒组、20μM CdCl2染毒组中p-eIF2α蛋白表达上调,差异均具有统计学意义(P<0.05)。二、BIP基因敲低后镉暴露人卵巢颗粒肿瘤细胞BIP、p-PERK及p-eIF2α的表达(1)与对照组(0μM CdCl2染毒组)相比,20μM CdCl2染毒组COV434细胞BIP基因表达上调,差异有统计学意义(P<0.01),p-PERK蛋白和p-eIF2α蛋白表达量上调,差异均具有统计学意义(P<0.01);(2)与20μM CdCl2染毒组COV434细胞相比,20μM CdCl2染毒组COV434-BIPshRNA细胞p-PERK蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),p-eIF2α蛋白表达下降,差异有统计学意义(P<0.05);(3)与20μM CdCl2染毒组COV434细胞相比,20μM CdCl2染毒组COV434-C细胞BIP、p-PERK和p-eIF2α表达差异无统计学意义(P>0.05)。三、镉暴露大鼠卵巢颗粒细胞BIP基因表达相关的microRNA改变(1)筛选出5个mi RNA:rno-miR-199a-5p、rno-miR-181a-5p、rno-miR-495、rno-miR-30b-3p及rno-miR-150-5p;(2)与对照组相比,rno-miR-181a-5p、rno-miR-30b-3p、rno-miR-150-5p、rno-miR-199a-5p、rno-miR-495高、中、低剂量组的表达水平变化均无统计学意义(P>0.05)。结论1镉通过诱导内质网应激致卵巢颗粒细胞损伤发生。2在高剂量(20μM)CdCl2暴露大鼠卵巢颗粒细胞时,rno-miR-181a-5p、rno-miR-30b-3p、rno-miR-150-5p、rno-miR-199a-5p、rno-miR-495可能未参与BIP基因的调控。