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目的:探讨妊娠期LPS诱导的ASD样行为仔鼠的脑组织TLR4信号通路及小胶质细胞分型变化的关系。方法:24只孕鼠随机平分为LPS处理组及PBS对照组,分别于怀孕9.5天时给予腹腔注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS;每只100μg/kg)或等量PBS,所产子代大鼠即为LPS组及对照组仔鼠。三箱社交实验、旷场实验、嗅觉适应/去适应实验、水迷宫测试检测子代大鼠社交行为、探索行为、刻板行为及学习记忆能力。Western blotting技术检测仔鼠成年期前额皮质中紧密连接蛋白(Occludin和Claudin-5)、小胶质细胞相关蛋白(IBA-1、iNOS及Arg-1)以及TLR4信号通路相关蛋白(TLR4、Phospho-NFκB p65、IKKα)表达水平变化。Real-time PCR技术检测IBA-1、iNOS及Arg-1 mRNA表达水平变化。免疫荧光染色检测仔鼠前额皮质中小胶质细胞形态学改变。ELISA试剂盒测定孕鼠血清LBP、TNFα及仔鼠脑组织TNFα、IL-10浓度。体外培养N9小胶质细胞系,予以TLR4抑制剂TAK242处理后,观察LPS诱导的N9细胞TLR4信号通路蛋白及小胶质细胞分型变化。结果:1.妊娠期LPS处理可诱导孕鼠血清LBP及TNFα显著升高(P(27)0.01,P(27)0.05),提示孕鼠呈免疫激活状态。2.行为学结果显示:LPS组仔鼠在玩具箱的时间显著高于PBS组(P(27)0.001),而停留在陌生鼠箱的时间显著低于PBS组(P(27)0.01);同时,嗅同龄陌生大鼠尿液的时间明显少于PBS组(P(27)0.001),而嗅蒸馏水及啤酒的时间两组间无显著差异;旷场实验中,LPS组仔鼠在测试中跨线数显著低于PBS组(P(27)0.01),且自梳理毛发时间显著延长(P(27)0.001);水迷宫测试结果显示LPS组仔鼠寻找平台所需的潜伏时间较PBS组显著延长(P(27)0.001)。3.孕期LPS处理后仔鼠成年期前额皮质中血脑屏障关键紧密连接蛋白Occludin和Claudin-5较PBS组显著降低(P(27)0.001)。4.LPS组仔鼠成年期前额皮质中炎性因子TNFα浓度较PBS组显著升高(P(27)0.01),而抗炎因子IL-10浓度显著降低(P(27)0.01)。5.LPS组仔鼠前额皮质中小胶质细胞标志物IBA-1 mRNA及蛋白表达水平显著高于PBS组(P(27)0.05),同时M1亚型标志物iNOS mRNA及蛋白表达水平较PBS组明显升高(P(27)0.05,P(27)0.05),而M2亚型标志物Arg-1的mRNA及蛋白表达水平却显著降低(P(27)0.05,P(27)0.001)。形态学观察发现PBS组的小胶质细胞胞体浓缩,多向分支丰富,而LPS组的小胶质细胞分支消失,胞体增大松散,呈激活态。6.LPS组仔鼠前额皮质中TLR4及Phospho-NFκB p65蛋白表达水平较PBS组显著升高(P(27)0.05,P(27)0.05),同时伴随IKKα蛋白表达水平增加(P(27)0.001)。7.体外实验结果显示,TAK242抑制了LPS诱导的小胶质细胞TLR4/NFκB信号通路的活化,且向M1型的转化减少。结论:妊娠中期LPS暴露激活了仔鼠前额皮质中TLR4/NFκB信号通路,诱导小胶质细胞向M1型极化,促进炎性因子分泌,这可能是导致子代大鼠孤独症样行为的一个风险因素。