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背景:慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)是指由各种原因导致的肾脏慢性结构和功能障碍,其中肾脏损伤史大于3个月。肾脏纤维化是各种肾脏疾病进展到终末期肾病(end stage of renal disease,ESRD)的主要病理学基础,包括肾小球硬化、肾小管萎缩以及肾间质纤维化等病理过程。在肾脏结构中,由于肾小管间质体积占总体积的90%,因此慢性肾小管间质病变在CKD的发生发展中起着重要的作用。微血管损伤后将引发如缺氧、炎症、内皮细胞转分化以及血管生成因子失衡等一系列的级联反应,最终导致肾纤维化,所以保护微血管可以缓解进行性肾损伤和改善肾小管间质病变。在血管生成素家族中,激活Ang1/Tie2信号系统具有抗血管炎症反应、降低血管通透性以及稳定血管和促进血管生长等作用。在形成慢性肾小管间质病变的基础上,有关激活Tie2信号来减少肾小管间质纤维化发生的研究尚未见相关报道,本实验拟探讨Tie2信号激活对叶酸肾病小鼠小管间质病变的改善作用,旨在为治疗慢性肾小管间质病变提供潜在的治疗靶点。方法:选取4周龄雄性CD1小鼠,向小鼠腹腔注射叶酸(溶解于5%Na HCO3,浓度为24mg/m L,剂量为240mg/kg),建立小鼠叶酸肾损伤模型组(F组),腹腔注射5%Na HCO3建立正常对照组(Con组)。实验第7天,称量12只F组小鼠和6只Con组小鼠体重,取各小鼠右肾,观察肾脏外观并称量肾重。将右肾一分为二,其中一半右肾做Masson染色和免疫组化,另一半右肾做Western blot。Masson染色观察组织病理,免疫组化检测成纤维细胞特异性蛋白-1(FSP-1)阳性表达情况,Western blot检测血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)表达情况。实验第9天,将12只F组小鼠分为6只F+I组和6只F+T组。向Con组及F+I组小鼠腹腔内注射大鼠Ig G抗体(1mg/只),向F+T组小鼠腹腔内注射大鼠抗小鼠激发型Tie2单克隆抗体(1mg/只)。实验第28天,称量三组小鼠体重,取各小鼠左肾,观察肾脏外观并称量肾重,取一半左肾做Masson染色和免疫组化,另一半左肾做Western blot,进行每只鼠前后各项指标分析。结果:1、肾重/体重比值(%):第7天,F+T组(0.8859±0.1168)和F+I组(0.8679±0.1029)比值均大于Con组(0.6671±0.708,p<0.05),提示肾脏肿大。第28天,F+T组(0.7883±0.1248)比值与Con组(0.9324±0.0937)相比无统计学差异(p>0.05);F+I组(0.6781±0.0602)比值小于Con组(p<0.01)。F+I组第28天比值小于同组第7天(p<0.01),提示F+I组肾脏萎缩;F+T组第28天比值与同组第7天相比无统计学差异(p>0.05)。2、肾小管间质病变面积/总面积比值(%):第7天,F+T组(76.61±6.81)和F+I组(74.11±8.38)比值均大于Con组(p<0.0001),提示广泛肾小管间质病变。到第28天,经Tie2抗体干预的F+T组肾小管间质病变面积比值(7.47±2.22)小于同组第7天肾小管间质病变面积比值(p<0.0001),经Ig G干预的F+I组肾小管间质病变面积比值(17.74±4.40)也小于同组第7天肾小管间质病变面积比值(p<0.0001),但F+T组第28天面积比值与第7天面积比值的差值(69.14±6.45)大于F+I组(56.37±4.36,p<0.01),提示F+T组比F+I组肾小管间质病变改善。第28天,F+T组肾小管间质纤维化面积比值(5.43±2.25)小于F+I组(15.07±4.56,p<0.01),提示Tie2抗体减少肾小管间质纤维化发生。3、免疫组化:第7天,F+T组和F+I组FSP-1阳性细胞数均大于Con组(p<0.0001)。第28天,F+T组FSP-1阳性细胞数小于F+I组(p<0.05)。F+T组和F+I组第28天FSP-1阳性细胞数小于同组第7天(p<0.001)。F+T组第28天FSP-1阳性细胞数与第7天的差值大于F+I组(p<0.01)。4、Weston blot:第7天,F+T组和F+I组VCAM-1表达水平均升高(p<0.01)。第28天,F+T组VCAM-1表达水平与Con组相比无统计学差异(p>0.05),F+T组VCAM-1表达水平低于F+I组(p<0.05)。F+T组第28天VCAM-1表达水平低于同组第7天(p<0.001)。F+I组第28天VCAM-1表达水平与同组第7天相比无统计学差异(p>0.05)。结论:(1)在形成慢性肾小管间质病变的基础上,Tie2信号激活能明显改善小鼠叶酸肾病肾小管间质病变,并且可以减少肾小管间质纤维化的发生;(2)Tie2信号激活可能通过降低FSP-1和VCAM-1表达,起到改善肾小管间质病变和减少肾小管间质纤维化的作用。