棉铃虫单核衣壳核型多角体病毒（HaSNPV）寄生于棉铃虫，通过产生几丁质酶分解昆虫体壁和中肠围食膜，抑制昆虫的生长繁殖。本实验室将HaSNPV几丁质酶基因构建到真核表达载体（pPIC9k）中，并转化到巴斯德毕赤酵母（GS115）中，得到表达几丁质酶的基因工程菌GS115-pPIC9k-ChiA。在此基础上，本论文开展了多拷贝GS115-pPIC9k-ChiA的筛选，培养条件优化，发酵液产物分离纯化及几丁质酶毒理学研究工作。GS115-pPIC9k-ChiA经MM和MD平板培养筛选出甲醇快速型（Mut⁺）转化子；经过遗传霉素梯度抗性水平的筛选，获得了抗4．0mg·mL^-1遗传霉素G418的重组菌株GS115-pPIC9k-ChiA 4．0。经甲醇诱导表达，用改良的Schales法测定几丁质酶含量为67．74U·mL^-1。经单因素实验和正交实验，几丁质酶表达最佳条件为：PEP浓度为2％，YNB浓度为0．67％，甲醇诱导浓度为1．5％，YE浓度为1．5％，每隔24h流加甲醇至浓度为1．5％，培养基pH6．0，250rpm，30℃摇床培养120h，几丁质酶含量为133．70U·mL^-1。将发酵液离心取上清，经（NH₄）₂SO₄盐析，13000rpm，离心25min，收集60％-80％饱和度下分离的蛋白质，透析后用DEAE-Sepharose-FastFlow柱层析进行纯化，柱子用pH8．0的0．025 mol·L^-1Na₂HPO₄-KH₂PO₄缓冲液平衡，以及pH8．0，含0．1M NaCl的0．025mol·L^-1 Na2HPO₄-KH₂PO₄缓冲液洗脱，流速76．4cm·h^-1，上样量3．7mL，则100mL发酵液最终得到2．795mg几丁质酶，纯化后的酶含量为943．085U·mL^-1，回收率为76．4％，纯化2．78倍。小菜蛾（Plutella xylostella）幼虫的触杀和胃毒实验表明，几丁质酶通过水解幼虫表皮细胞及围食膜结构致其死亡。对植物病原真菌小麦根腐（Bipolaris sorokinianum），烟草赤星（Tobacco Alternaria alternata），番茄灰霉（Tomato botrytis cinerea）和苹果炭疽（Colletitrichum gloeosporiodes）的抑菌实验表明，几丁质酶通过水解真菌细胞壁抑制菌体生长繁殖，但对苹果炭疽抑制效果不明显。