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目的:⑴了解乌司他丁对脓毒症患者PBMCs中IL—26与STAT-1/3的mRNA表达量的变化以及临床意义。⑵了解乌司他丁对脓毒症患者外周血血清中IL—26的蛋白含量的变化及临床意义。
方法:本研究于2008年6月至2009年3月收集来自中山大学附属第一医院普内科、CCU、MICU诊断符合1991年ACCP/SCCM联合倡仪提出的SIRS标准和1995年10月庐山全国危重病急救医学学术会议制订的脓毒症和MODS病情分期诊断标准的脓毒症患者25例。首次于确诊6小时内采血,每次采血4mL,2mL立即注入含有无肝素的5mL无菌核酸离心管,用红细胞裂解液裂解红细胞与血小板后分离出PBMCs后,置于RNA稳定剂稳定RNA,并于—80℃冰冻保存,用于检测mRNA。另2mL置于5mL无肝素离心管,离心后抽取血清,—80℃冰冻用于蛋白检测。第24小时、第48小时、第120小时采血同上。所有采血过程严格无菌操作。用酶联免疫吸附剂测定(ELISA)法检测相应血清中TNF—α、IL—26的蛋白含量。采用用以cDNA为内参标的逆转录—聚合酶链(Reverse Transciption Polymerase Chain Reaction,RT—PCR)方法检测STAT-1/3、TNF—α、IL—26 mRNA相对表达量:提取总RNA;分别加STAT-1/3、TNF—α、IL—26及参比基因TBP引物,RT—PCR;并通过real time PCR检测系统对PCR反应进程中的荧光信号强度进行实时监测,最终对实验数据应用比较Ct法进行相对定量。求出各基因的mRNA相对表达量。
结果:①脓毒症患者IL—26的变化:脓毒症患者的PBMCs中IL—26mRNA表达量于入院时UTI组、NAT组、DEA组三组间无显著差异(P均>0.05);24小时UTI组(1.8760±0.7193)显著高于NAT组(0.7533±0.2908)和DEA组(0.6452±0.0607)(P均<0.05);48小时UTI组(1.5308±0.3904)显著高于NAT组(0.8958±0.3671)和DEA组(0.6042±0.5407)(P均<0.05);120小时UTI组(1.1679±0.2625)显著高于NAT组(0.6994±0.2746)和DEA组(0.5343±0.0765)(P均<0.05);而24小时、48小时和120小时DEA组与NAT组无显著差异(P均>0.05)。②脓毒症和MODS患者PBMCs STAT-1/3 mRNA表达量的变化: STAT-1mRNA表达量于24小时NAT组(3.9732±3.3100)明显高于UTI组(2.7580±2.2603)和DEA组(3.3857±0.1736),但48小时时三组之间均无显著性差异(P均>0.05);于120小时DEA组(4.0148±0.2015)显著高于UTI组(1.5938+±.1259)(P<0.05)。③脓毒症患者TNF-α的变化:PBMCs中TNF-α mRNA表达量于入院时UTI组、NAT组、DEA组均无显著差异(P均>0.05);24小时NAT组(1.1811±0.7965)显著高于UTI组(0.7833±0.4731)(P<0.01);而48小时、120小时三组之间均无显著差异(P均>0.05)。④MODS患者的临床评分:在脓毒症引起的MODS患者中,UTI组患者平均年龄(52.00±17.71)岁(32~70)岁,DEA组患者平均年龄(68.00±7.21)岁(62~76)岁,UTI组与DEA组患者年龄构成无显著差异;MODS评分UTI组(10.25±1.20)分(7~14)分,DEA组为(20.00±3.30)分(15~25)分,DEA组显著高于UTI组(P<0.05);本研究中死亡构成比为37.5%。⑤在脓毒症患者中,IL—26mRNA表达量与IL—26血清蛋白含量呈显著的正相关关系(r=0.386,P<0.05);TNF—αmRNA表达量与TNF—α血清蛋白含量呈显著的正相关关系(r=0.287,P<0.05);IL—26mRNA表达量与STAT—3mRNA表达量呈显著的正相关关系(r=0.647,P<0.05);而与STAT-1与TNF—α之间则无明显的相关性。STAT-1mRNA表达量与TNF—α mRNA表达量之间呈显著的正相关关系(r=0.385,P<0.05);同时,STAT-1mRNA表达量与STAT—3mRNA表达量也呈显著的正相关关系(r=0.266,P<0.05);STAT—3mRNA表达量与TNF—α mRNA表达量无明显相关性。
结论:⑴在脓毒症的发生发展过程中,乌司他丁可使IL—26及STAT—3峰值前移,而使TNF—α峰值后移。⑵在临床脓毒症患者PBMCs中,IL—26的表达可能起到抑制炎症的作用,IL—26与其受体结合后,可能是通过STAT—3通路进行信号转导。⑶脓毒症引起的MODS患者,若IL—26与STAT—3表达进行性减少,提示预后不良。