蛋白质饲料中三聚氰胺的可视化检测

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甲烷氧化菌是甲基菌中的一个分支,它是一种革兰氏阴性菌,直接以甲烷为能源和碳源。甲烷氧化菌素(Methanobactin,Mb)是甲烷氧化菌向周围释放出的一种荧光肽,它由两个丝氨酸、甘氨酸、色氨酸、两个半胱氨酸、蛋氨酸组成,含有与铜高度络合2个氧唑N和2个硫酰S。甲烷氧化菌素能结合和催化还原Au(Ⅲ)为Au(0)。在有对苯二酚的参与下,能够为甲烷氧化菌素还原Au(Ⅲ)提供电子供体,可以持续生成金纳米颗粒,由于金纳米颗粒具有等离子体共振效应,在用紫外可见吸收光谱扫描在500nm到600nm范围内有明显的特征吸收峰,呈现出特殊的颜色,可以用肉眼所识别的颜色变化可以完成某些物质的检测。近几年来蛋白质饲料中添加三聚氰胺的范围几乎涵盖了整个饲料行业,牛羊饲料、禽饲料、猪饲料和水产饲料、宠物饲料都或多或少地混有“三聚氰胺”,三聚氰胺的加入明显增加了食物中的含氮量,因此迫切需要建立一种简便、有效分析蛋白质饲料和其他食品中的三聚氰胺的快速检测方法。本论文利用甲烷氧化菌素介导纳米金合成过程可视化的检测蛋白质饲料中的三聚氰胺,方便、快捷,检测极限远远低于国家规定的三聚氰胺的1ppm标准。对蛋白质饲料中不同浓度的三聚氰胺进行了检测,考察了蛋白质饲料中几种成分对检测的干扰,计算了该方法的检测限及三聚氰胺的加标回收率。1、甲烷氧化菌素可以以对苯二酚作为外源电子供体催化Au(Ⅲ)持续还原形成纳米金。研究了金纳米粒子的最佳合成条件,PH=5.1,甲烷氧化菌素Au(Ⅲ)的摩尔比在0.8:1,对苯二酚:Au(Ⅲ)的摩尔比在0.4:1,纳米金随着反应的继续会越来越多,待到反应结束,并对制备的纳米金溶液进行了紫外可见吸收光谱、透射电镜(TEM)分析。2、研究了甲烷氧化菌素介导纳米金合成过程中检测三聚氰胺的机理,由于甲烷氧化菌素可以还原Au(Ⅲ)形成纳米金,溶液呈现酒红色或葡紫色,而三聚氰胺可以抑制甲烷氧化菌素还原Au(Ⅲ)形成纳米金,所以溶液没有颜色变化,通过比色法可以很直观的检测三聚氰胺,通过紫外可见吸收光谱对加入三聚氰胺和未加入三聚氰胺的样品在200nm到800nm范围内进行扫描,可以发现未加入三聚氰胺的在500nm到600nm内有明显的特征吸收峰,证明有金纳米颗粒的形成,加入三聚氰胺的则在此范围内没有吸收峰,说明没有金纳米颗粒的生成。检测三聚氰胺的最佳条件,室温下,PH=5.1,甲烷氧化菌素Au(Ⅲ)在0.7:1,对苯二酚Au(Ⅲ)在0.25:1的条件下,对不同浓度的三聚氰胺进行检测了实验,检测最低限达到了0.6ppm,远远低于国家标准的1ppm.3、检测蛋白质饲料中的三聚氰胺原理是依据是三聚氰胺能阻止甲烷氧化菌素催化还原Au(Ⅲ)生成纳米金,通过比色法来检测三聚氰胺。实验表明,三聚氰胺的浓度与此浓度下形成的金纳米颗粒有着良好的线性关系,用紫外可见吸收光谱可以实现定量的检测,检测范围在0.05ppm到0.5ppm。用肉眼检测限度为0.6ppm,加标回收率在97-103%。通过紫外可见吸收光谱对可能存在的干扰因素检测发现只有Vb12及V。有非常小的影响。
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