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天然免疫反应在机体抵抗病原体入侵、保护自身正常生理功能上起着重要作用。然而鉴于先天免疫学科发展较晚,目前我们对先天免疫反应,尤其是cGAS-STING通路的上游知之甚少,因此,寻找参与天然免疫信号通路调控的基因,尤其是cGAS-STING通路的相关基因,将对阐明病源DNA引发的自身免疫应答反应的感应机制有重要的意义。同时目前对于如何大规模筛选参与调控天然免疫通路的相关基因尚无十分有效的方法。尽管前人已经利用过表达系统结合IFNβ启动子诱导的Luciferase筛选系统,筛选到了 MITA、STING等重要基因。然而受困于Luciferase筛选系统过高的噪音背景以及巨大的工作量,Luciferase筛选系统受到了严重的制约。而RNAi介导的全基因组范围内功能缺失筛选,因并不能使蛋白功能完全缺失,而且还存在潜在的脱靶风险,并没有得到较为广泛的应用。为了能够找到参与天然免疫信号通路,尤其是cGAS-STING通路中的重要调控基因,本研究将CRISPR全基因组敲除文库技术与流式细胞分选技术(FACS)、TK/DTA负向筛选技术相结合,建立了一套经济高效的筛选方案。我们将这个系统进行改造,利用CRISPR全基因组敲除文库感染BGC-823细胞后,用人类I型单纯疱疹病毒(HSV-1)刺激细胞,发现某些基因发生缺失后,细胞能够抵抗病毒的侵染。接着,我们将这些细胞扩大培养,扩增出sgRNA片段,二代测序鉴定出30个宿主基因缺失能够抵抗HSV-1的侵染。在这些候选基因中有目前已报道过与HSV-1复制可能有关的HCFC1R1等基因,另外还有一些基因未见报道。我们成功利用这个系统筛选到参与调控病毒感染的宿主基因。另一方面,我们对参与天然免疫反应的主要靶标基因IFNβ的启动子区域进行了截短分析,确定了最佳的启动子区域。构建了由IFNβ诱导表达的EGFP报告基因载体。同时还构建了由IFNβ诱导表达的自杀基因TK和DTA负筛报告基因载体。经验证,该系统能够正常工作,可用于高通量筛选天然免疫信号通路中的调控基因。总之,通过全基因组CRISPR-Cas9敲除文库,我们建立了一套能够用于鉴定先天免疫信号通路调控基因的筛选系统,并使用该系统成功地鉴定了涉及调控HSV-1感染的宿主基因。未来,我们将使用这个系统对识别不同病原相关分子模式(脂多糖、RNA、DNA)的先天免疫信号通路中的调控基因进行研究。