副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis,HPS）引起猪的多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎,主要危害2周龄～4月龄的猪,给全球的养猪业带来巨大的经济损失。猪链球菌（Streptococcus suis,SS）是一种在全世界范围内广泛存在的重要的病原菌,受其影响,养猪业国家常常遭受巨大的经济损失。猪链球菌现在分为33个血清型,猪链球菌2型（SS2）是其中最重要的,流行最广的血清型。人接触感染猪链球菌的病猪或食用病死猪肉,可能会感染发病。Fur家族蛋白质,包括Fur、Zur、Mur、Nur、PerR等,是细菌体内的重要的金属调节蛋白,与细菌所需的重要金属离子的吸收调节密切相关,有些还能感应其他信号如过氧化物或血红素。它们能够抑制或激活为数众多的基因的启动子的转录,对细菌的生长繁殖、毒力以及抵抗外界不利影响方面都起着着重要的作用。本研究旨在克隆表达HPS的Fur蛋白和SS2的PerR蛋白,分别研究它们与HPS和SS2相关基因启动子的相互作用,为这些基因表达调控机制的研究奠定基础。主要研究内容和结果如下:1.副猪嗜血杆菌的fur基因和猪链球菌perR基因的克隆表达根据已经公布的基因序列设计引物,利用PCR方法克隆HPS的fur基因以及SS2的perR基因,在大肠杆菌大肠杆菌BL21（DE3）中表达,表达产物经过亲和层析柱纯化,超滤离心,得到纯化浓缩后的蛋白Fur-HPS和PerR-SS2。经SDS-PAGE分析,所得蛋白与目地蛋白大小一致。2.副猪嗜血杆菌的Fur蛋白和猪链球菌PerR蛋白目标基因启动子片段的制备利用实验室SCOTS技术筛选出的铁限制条件下HPS和SS2中转录表达上调的基因,结合生物信息学方法分析及相关文献报道,预测出分别与Fur-HPS和PerR-SS蛋白互作的目标基因启动子片段,设计引物扩增基因上游启动子片段,作为与这两种蛋白互作的目标基因启动子片段。所得的PCR产物与预计大小一致。3.Fur蛋白和PerR蛋白与启动子片段的相互作用的EMSA分析将Fur-HPS蛋白和PerR-SS蛋白分别与可能含有"fur-box"和“perR-box”的目标基因片段相互作用,通过电泳迁移位移分析（EMSA）的方法检测蛋白和DNA的结合活性。电泳后,用溴化乙锭（EB）溶液染色。结果显示蛋白与目标DNA均能结合且效力较高。在加入Fe²⁺、Zn²⁺、Mn²⁺时,蛋白与目标DNA的结合效率更高,尤其是加入Fe²⁺时。