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目的:1.探讨有热缺血的供肝胆道耐受冷保存的安全时限,为临床肝移植术后早期肝内外胆管不可逆性坏死和原发性移植肝无功能的防范提供实验依据。2.探讨有热缺血的供肝胆道冷缺血损伤机制。3.探讨冷保存后供肝胆道灌注液中酶系变化与胆道缺血性损伤的关系,为植入前评价供肝质量寻求一种可能的方法。方法:以健康雄性SD大鼠为研究对象。1.建立大鼠肝移植的供肝切取的动物模型,切取供肝后0-4℃冷保存。2.将实验动物分为7组,每组动物8只,分别在冷保存0h、4h、8h、12h、16h、20h、24h时取:①胆道灌洗液标本2ml:检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)和γ-谷氨酰转肽酶(GGT);②供肝胆总管:检测胆管组织Na~+,K~+ATP酶活力,病理检查观察胆管组织损伤程度,并进行形态学量化评分;⑧供肝组织:做石蜡切片病理检查。3.实验数据的统计学分析。结果:1.在热缺血10分钟情况下,大鼠供肝胆道灌洗液中肝脏酶系指标(ALT、AST、ALP和GGT)随冷保存时间延长而升高,与冷保存早期(＜12h)各组相比,冷保存12h后各组显著升高(P＜0.01)。2.随保存时间的延长,供肝胆管组织Na~+,K~+-ATP酶活力显著下降,各组间比较均有统计学意义(P＜0.01);3.供肝组织病理检查发现供肝随保存时间的延长,胆管组织损伤程度逐渐加重,病理形态学评分示与冷保存早期(＜12h)比较,冷保存12h后各组有显著变化(P＜0.01);肝细胞亦随保存时间的延长发生明显的形态学的改变。结论:1.热缺血限定在10分钟内,冷保存延长至12h对供肝胆管组织是安全的,超过12h胆管组织可能发生严重损伤。2.Na~+,K~+-ATP酶在热缺血供肝胆管冷缺血性损伤中起重要作用,是介导胆管组织损伤的机制之一。3.供肝胆道灌洗液中酶系指标(ALT、AST、ALP和GGT水平)可作为反映供肝质量的指标。