论文部分内容阅读
目的:探讨大黄素联合大黄酸对百草枯中毒大鼠肺损伤保护作用,并对其部分作用机制进行研究。方法:选用40只健康成年雄性SD大鼠,随机分为四组,即正常对照组(A组)、模型组(B组)、大黄素干预组(C组)、大黄素联合大黄酸干预组(D组),每组10只。A组予以2ml 0.9%氯化钠溶液灌胃,B、C、D三组均予以百草枯溶液按照40mg/kg稀释成2ml一次性灌胃,造模。自第2天开始C组予以大黄素按溶液照40mg/kg 2ml灌胃,D组予以40mg/kg大黄素溶液+40mg/kg大黄酸溶液共2ml联合灌胃,A、B两组分别予以等体积0.9%氯化钠溶液灌胃,连续灌胃27天,第28天处死大鼠,取肺组织行苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE),并在普通光学显微镜下观察肺组织炎症及损伤情况,行masson染色观察肺组织纤维化情况;取适量大鼠右肺组织制备组织匀浆,应用酶联免疫吸附法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测肺组织匀浆液中转化生长因子(transforming growth factorβ1,TGF-β1)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factorα,TNF-α)及白介素1(Interleukin-1,IL-1)浓度,同时应用蛋白质印迹法(Western-blot)检测Smad2、Smad7蛋白水平。结果:1.大鼠一般情况:对照组大鼠精神状态良好,反应敏捷,毛色光洁,口唇红润,进食进水及排泄均正常,体重稳定增长。B、C、D三组大鼠自百草枯(paraquat,PQ)中毒24小时后逐渐出现精神萎不振,反应差,活动减少、进食进水减少,排泄异常,B组大鼠大便干结,且排泄次数减少;C、D组大鼠排泄次数较B组明显增多且大便稀黄,少数动物几乎不进食、进水,出现明显的倦怠和呆滞,走路不稳,肢体无力,活动减少,部分大鼠出现四肢痉挛和抽搐,毛发干枯;B、C、D三组大鼠体重增长较A组均存在不同程度放缓,且C、D干预组大鼠体重增长较B组快。2、呼吸及死亡情况:A组大鼠呼吸规律正常,B、C、D三组大鼠自PQ中毒后24小时后出现呼吸频率增快,部分大鼠自中毒48-72小时出现明显呼吸窘迫甚至死亡,上述表现自实验第6天开始改善,其中B组在实验开始一周内死亡2只,C、D两组各死亡1只,在实验进行至第13-14天B组再次死亡1只,两干预组在实验进行至20天-21天时,两组大鼠各死亡一只。3、HE染色显示:A组大鼠肺组织、支气管、肺泡轮廓清晰,结构完整,肺泡间隔正常,组织联系紧密,细胞质均匀,无明显炎性细胞浸润;B组大鼠肺组织、肺泡均存在不同程度破坏,肺泡间隔充血肿胀、增宽、肺泡变窄,部分肺泡融合,肺泡间隔增厚明显,部分间隔可见淋巴细胞浸润,纤维组织增生,C、D干预组肺组织、支气管、肺泡结构破坏程度较B组轻,且肺泡间隔充血肿胀、炎症细胞浸润、间隔增厚、肺间质纤维化等程度均较B组减轻。4、masson染色:A组肺间质可见少许蓝染纤维组织,B、C、D三组肺间质蓝染纤维组织明显增多,且B组较C、D两组多。5、与A组对比,B、C、D三组大鼠肺组织TGF-β1、CTGF、TNF-α、IL-1含量均明显升高,且C、D两干预组较B组含量明显降低(P﹤0.05),差异具有统计学意义;在TGF-β/Smad信号通路中,Smad2的表达显著增加,而Smad7的表达明显下降。结论:大黄素联合大黄酸较单用大黄素组在减轻PQ中毒大鼠一般症状和呼吸困难症状以及减轻肺纤维化方面作用明显增强。其作用机制可能为:与抑制TNF-α、IL-1升高而减轻PQ中毒所致炎症反应有关;与抑制TGF-β1和CTGF的生成,减轻EMT、ECM,从而减轻肺纤维化有关;与下调Smad2的表达和上调Smad7表达而影响TGF-β/Smad信号通路的激活有关。