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绵羊肺腺瘤病(Ovine pulmonary adenocarcinoma,OPA)能够引起绵羊进行性消瘦、咳嗽和呼吸困难,最终转归为死亡,造成羊养殖业的巨大经济损失。绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)是引起OPA的病原,囊膜蛋白(Envelope,Env)则是JSRV的主要致癌蛋白。OPA病肺组织被认为是人鳞状上皮腺癌(Lepidic predominant adenocarcinoma,LPA)的良好研究模型。前人研究表明,OPA的形成是一个长期的、多因子参与、多基因改变积累的过程,而这一过程也受到细胞凋亡相关因子的复杂调控。为了探究凋亡相关因子在自然感染OPA病肺组织中的表达情况及作用,本试验进行了如下研究:(1)为了鉴定自然感染OPA病例,通过聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)初步筛选表达JSRV env基因的样本,再通过病理组织学检测,筛选特征病变为肺泡上皮细胞和支气管上皮细胞大量增生,且具有典型“菜花样”腺瘤灶的肺组织样本。进一步通过免疫组织化学试验(Immunohistochemistry,IHC)及蛋白免疫印迹(Western blotting,WB)试验筛选JSRV Env大量表达的样本。结果显示:采集的60例肺组织样本中,确诊有3例自然感染OPA病肺组织。(2)为了探讨凋亡相关因子在OPA病肺组织中的定位分布,通过IHC检测Bax、Caspase3和Bcl-2在自然感染OPA病肺组织和健康绵羊肺组织中的表达分布。结果显示:在自然感染OPA病肺组织中,Bax、Caspase3主要定位于增生的肺泡II型上皮细胞及肿瘤细胞的细胞浆和细胞膜,Bcl-2主要定位于肺泡II型上皮细胞及肿瘤细胞的细胞浆。在健康绵羊肺组织中,Bax、Caspase3和Bcl-2在肺泡上皮细胞中均有阳性信号表达。(3)为了探讨OPA肺组织中凋亡相关因子在基因层面的表达变化,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测凋亡相关因子Bax、Caspase3和Bcl-2在自然感染OPA病肺组织中表达量。结果显示:在基因层面上Bax和Caspase3的表达量均低于健康羊肺组织的表达量(P<0.05),Bcl-2的表达量高于健康羊肺组织表达量(p<0.05)。(4)为了探讨OPA肺组织中凋亡相关因子在蛋白层面的表达变化情况,通过WB定量检测确定凋亡相关因子Bax、Caspase3和Bcl-2在自然感染OPA病肺组织中表达量。结果显示:在蛋白层面上Bax和Caspase3的表达量均低于健康羊肺组织的表达量(p<0.05),而Bcl-2的表达量高于健康羊肺组织表达量(p<0.01)。综上所述,当JSRV Env大量表达时,凋亡相关因子的表达受到影响,在基因和蛋白水平Bax、Caspase3表达均降低,Bcl-2表达升高,OPA病肺织凋亡水平明显低于健康绵羊肺组织,表明细胞凋亡参与OPA致瘤过程。本试验对OPA致瘤过程中凋亡相关因子的表达做出了初步探究,为进一步探讨凋亡对OPA、凋亡对LPA乃至凋亡对肿瘤致瘤机制的相关研究提供了基础资料。