【摘 要】
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猫泛白细胞减少症（Feline Panleukopenia,FP）是由猫泛白细胞减少症病毒（Feline Panleukopenia Virus,FPV）引起的猫及猫科动物的一种急性高度接触性传染病,又称为猫瘟热、猫传染性肠炎、猫细小病毒感染。FPV感染宿主谱广、病死率高,尤其是猫、水貂和浣熊等幼龄动物,疫苗接种是目前预防猫泛白细胞减少症的主要途径之一。了解当前猫泛白细胞减少症病毒的遗传变异情况,
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猫泛白细胞减少症（Feline Panleukopenia,FP）是由猫泛白细胞减少症病毒（Feline Panleukopenia Virus,FPV）引起的猫及猫科动物的一种急性高度接触性传染病,又称为猫瘟热、猫传染性肠炎、猫细小病毒感染。FPV感染宿主谱广、病死率高,尤其是猫、水貂和浣熊等幼龄动物,疫苗接种是目前预防猫泛白细胞减少症的主要途径之一。了解当前猫泛白细胞减少症病毒的遗传变异情况,对及时做出诊断和预测以及研究新型疫苗对该病的防治都具有重要意义。2017～2020年间我们从浙江某动物医院收集了 23份疑似感染FPV的临床样本。提取样本的DNA进行PCR鉴定,共20份样品为FPV阳性,在FK81细胞上传代分离病毒,并进行序列比对和遗传进化分析。选取其中一株FPV分离株ZJFPV2进行电镜观察、全基因组序列鉴定与分析。结果显示:20株FPV分离株之间的核苷酸同源性为98.7%～100.0%,分离株与37株GenBank上下载的参考株的核苷酸同源性为97.3%～100.0%,分离株与参考株同源性很高,变异不大。20株FPV分离株分别归属于G2群和G3群。对FPV的分离鉴定、分子流行病学分析可对后续开发针对FPV流行毒株的有效疫苗提供基础。PCR扩增ZJFPV2分离株VP2基因,插入原核表达载体,构建了重组质粒pET32a（+）-VP2和pET28a（+）-VP2,转化至大肠杆菌表达菌株BL21（DE3）中,使用IPTG进行诱导表达。表达产物经SDS-PAGE电泳鉴定,出现了与预期相符的大小约64.6 kDa的条带,结果表明:重组质粒pET32a（+）-VP2和pET28a（+）-VP2构建成功,在大肠杆菌表达菌株BL21（DE3）中进行表达。进行Western blot,WB结果表明:pET32a（+）-VP2成功融合了 His-标签蛋白。将pET32a（+）-VP2在BL21（DE3）中大量表达,使用His-标签蛋白纯化柱对表达的VP2重组蛋白进行纯化,并将其作为检测抗原,建立了间接ELISA方法。确定了反应的优化条件:抗原包被浓度为5.64 μg/mL,阴、阳性血清浓度为1:40,包被条件为4℃过夜,封闭时间为1h,显色时间为15min,该方法具有较高的重复性和特异性,这些结果为FPVVP2抗体检测奠定了基础。PCR扩增ZJFPV2分离株VP2基因,插入不同的真核载体,构建真核表达质粒pcDNA3.1（+）-VP2和pCAGGS-VP2,转染FK81细胞,间接免疫荧光结果表明:VP2基因在pcDNA3.1（+）和pCAGGS两种真核表达质粒中均表达。大提质粒pCAGGS-VP2和pcDNA3.1（+）-VP2分别免疫小鼠,设置空载体为阴性对照。小鼠三免两周后获取血清,间接ELISA方法检测小鼠血清中抗体的水平,结果显示:小鼠血清内能够检测到特异性抗体,而对照组未检出。表明本研究构建的真核重组质粒pCAGGS-VP2和pcDNA3.1（+）-VP2能够诱导小鼠产生特异性抗体,为进一步FPV核酸疫苗的研究提供了基础。
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