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目的:本课题将扶正祛邪中药复方制成含药血清,对人慢性粒细胞白血病急变期耐药细胞K562/A02(以下简称耐药细胞K562/A02)进行处理,检测经不同剂量含药血清处理后K562/A02细胞耐药率的逆转、对K562/A02细胞抑制率的影响及细胞内阿霉素(ADM)的荧光强度、K562/A02细胞凋亡率的表达等。观察经含药血清处理后K562/A02细胞对ADM耐药性的逆转效果,并探讨含药血清逆转K562/A02对ADM耐药性的作用机制。 方法:1.中药复方的制备:将扶正祛邪中药复方按照传统常规方法水煎,浓缩为1g/ml的浓缩药液,保存备用。2.含药血清的制备:将24只新西兰大白兔随机分为空白对照组和高、中、低剂量实验组共4组,每组6只。实验组以扶正祛邪中药复方灌服,空白对照组予正常喂养。实验组于最后一次给药2h后,在无菌条件下取股动脉血,分离血清,将同组血清灭活,保存备用。空白对照组以相同的方法取血。3.细胞培养:分别将细胞K562、K562/A02进行培养,在K562/A02细胞培养体中加入ADM维持其耐药性,在细胞生长期时进行传代,2-3d传代一次,更换细胞培养液。4.MTT法分别检测ADM对细胞株K562、K562/A02的细胞毒性,计算细胞K562/A02的耐药倍数;MTT法检测经不同剂量含药血清联合ADM处理后K562/A02细胞对ADM耐药性的逆转倍数;MTT法检测不同剂量的含药血清对细胞K562、K562/A02的抑制率;流式细胞术检测经不同剂量含药血清处理后K562/A02细胞内ADM的荧光强度及K562/A02细胞凋亡率的表达。 结果:1.在细胞K562、K562/A02的培养液中分别加入不同浓度的阿霉素(ADM),培养72h后,细胞K562的IC50值为0.72±0.26μg/ml;细胞K562/A02的IC50值则为26.39±2.15μg/ml,耐药倍数(RF)=41.60,即K562/A02细胞的耐药倍数为41.60倍。2.不同剂量的含药血清能够提高耐药细胞K562/A02的逆转倍数,高剂量含药血清组的逆转倍数为28.97倍,中剂量含药血清组的逆转倍数为9.86倍,低剂量含药血清组的逆转倍数为5.75倍。3.不同剂量的含药血清能够抑制K562、K562/A02细胞的增殖,剂量越大,抑制作用越强,各组间差异均有显著统计学差异(P<0.01)。4.不同剂量的含药血清对K562/A02细胞中ADM蓄积浓度的影响:高剂量含药血清+ADM组中K562/A02细胞内ADM的蓄积浓度达到最高,空白兔血清+ADM组中K562/A02细胞内ADM的蓄积浓度最低,各组耐药细胞内ADM的蓄积浓度为:高剂量含药血清+ADM组>干扰素+ADM组>中剂量含药血清+ADM组>低剂量含药血清+ADM组>空白兔血清+ADM组,高剂量含药血清+ADM组、中剂量含药血清+ADM组、低剂量含药血清+ADM组及阳性对照组分别与空白对照组比较都具有显著性差异(P<0.01),除高剂量含药血清+ADM组与阳性对照组比较有统计学差异外(P<0.01),中剂量含药血清+ADM组及低剂量含药血清+ADM组与阳性对照组比较均无统计学差异(P>0.05)。5.不同剂量的含药血清能够诱导K562/A02细胞的凋亡,在72h,高剂量含药血清+ADM组的凋亡率为75.63±1.36,中剂量含药血清+ADM组的凋亡率为43.02±0.39,低剂量含药血清+ADM组的凋亡率为15.85±0.37,干扰素+ADM组的凋亡率为66.38±0.94,空白兔血清+ADM组的凋亡率为14.40±0.36,各组均数相比较均有显著统计学差异(P<0.01),说明含药血清能够以剂量及时间依赖的方式促进耐药细胞的凋亡。 结论:1.含药血清具有抑制耐药细胞K562/A02增殖的作用。2.含药血清能够逆转耐药细胞K562/A02对ADM的耐药性,其机制与含药血清对耐药细胞具有抑制作用及增强耐药细胞内药物浓度、诱导耐药细胞凋亡有关。