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1.实验目的:研究硫利达嗪对离体胃癌细胞株SGC-7901的凋亡作用,并探讨其作用机制。2.实验方法:以人离体胃癌SGC-7901细胞株为培养实验研究对象。根据文献数据和预实验,使用不同浓度的硫利达嗪(0、10、20、30、40、50、60、70、80μmol/L)作用于相同对数生长期的胃癌SGC-7901细胞(等量PBS)24h。2.1.MTT比色法检测细胞增殖抑制率:硫利达嗪对胃癌SGC-7901细胞的增殖抑制作用:使用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度的硫利达嗪(10、20、30、40、50、60、70、80μmol/L)作用于相同对数生长期的胃癌SGC-7901细胞24h后的增殖抑制作用,并应用统计学计算其半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration of a substance,IC50)。2.2.显微镜下观察并比较细胞形态学变化:细胞光镜(×200倍)下观察硫利达嗪对胃癌SGC-7901细胞的增殖抑制作用的形态学结果,使用不同浓度的硫利达嗪作用于胃癌SGC-7901细胞24h后,在显微镜下观察其细胞的形态学变化。2.3.Western blotting检测相关抗凋亡蛋白和促凋亡蛋白的表达情况:应用Western blotting法检测不同浓度的硫利达嗪作用于胃癌SGC-7901细胞24h后,其促凋亡蛋白bax、caspase-3和抗凋亡蛋白bcl-2蛋白的表达水平的情况。2.4.流式细胞仪检测细胞凋亡率:为了检测不同浓度的硫利达嗪对胃癌SGC-7901细胞的凋亡的影响,使用不同浓度的硫利达嗪干预胃癌SGC-7901细胞24h后,应用流式细胞仪检测其细胞凋亡率。3.实验结果:MTT法检测结果显示:硫利达嗪在10-80μmol/L的浓度范围内作用于胃癌SGC-7901细胞24h能抑制其增殖,MTT数据表明其增殖抑制率有浓度递增趋势呈剂量依赖性增强。通过SPSS 16.0软件计算,硫利达嗪对SGC-7901细胞的半抑制浓度IC50为49.51±3.95μmol/L。组间两两比较差异有统计学意义(p<0.05)。3.1.显微镜下观察各实验组中的细胞形态学变化:在显微镜细胞光镜(×200倍)下观察不同浓度的硫利达嗪作用于胃癌SGC-7901细胞24h后,对照组细胞呈现标准的贴壁生长,轮廓明确、清楚,生长旺盛,而在实验组中的胃癌SGC-7901细胞随着药物浓度的增加,均显示细胞体积变小,轮廓不清,贴壁不紧,细胞核体积变小,核仁数目减少,染色变淡,边缘透亮,间隙增加,细胞形态变圆,细胞异形性减少,部分细胞不再贴壁。3.2.Western blotting检测相关抗凋亡蛋白和促凋亡蛋白的表达结果:不同浓度的硫利达嗪作用胃癌SGC-7901细胞24 h后,Western blot结果显示,随着药物浓度的增加,抗凋亡蛋白bcl-2下调、促凋亡蛋白bax上调,caspase-3蛋白上调,各实验组与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。3.4.流式细胞术检测硫利达嗪对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响:不同浓度的硫利达嗪作用胃癌SGC-7901细胞24 h后,流式细胞仪检测结果显示,药物作用24 h后SGC-7901细胞的凋亡率分别为9.67%、19.06%、25.9%。差异具有统计学意义(P<0.05)。4结论:硫利达嗪能够显著抑制人胃癌细胞的增殖,并诱导其凋亡,其毒性机制可能与下调肿瘤细胞内抗凋亡蛋白bcl-2、上调促凋亡蛋白bax、caspcase-3有关。