肿瘤相关的细胞外泌体的提取表征及其基于适配体的应用方法研究

来源 :北京化工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:geng20516136
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外泌体是所有细胞都会产生,并通过生物学机制自主分泌的一种直径在30-150 nm之间的细胞外小囊泡。近年来,外泌体在医学领域发展飞快,在多类病理疾病的诊断及治疗方向皆有广泛的应用,特别是在癌症的诊断治疗方向。而适配体是外泌体在提取与应用上的重要途径之一。与抗体相比,适配体具有化学性质稳定、无免疫原性等优点。因此,利用适配体分离检测外泌体,是更具前景的选择。当前与外泌体相关的适配体,仅停留在外泌体的内容物层面,对于完整外泌体的适配体,目前还未有报道。而不同外泌体因其细胞来源不同,本身存在着各类差异,如能筛选出完整外泌体的适配体,将使利用适配体进行的外泌体分离或鉴定结果更加精准。试纸条技术是一种快速方便的检测方法,如能试纸条技术与适配体相结合,用于定性检测外泌体,将为外泌体的检测提供新的方法途径。本课题选择了两种不同类型的肿瘤相关典型细胞,人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)和非小型肺癌细胞(A549),分别提取了两种细胞的外泌体,对其分别进行了表征。以HUVEC外泌体为靶标,利用4 μm醛基乳胶珠放大其粒径大小,对其进行了核酸适配体的筛选,并优化了筛选条件。虽然筛选结果并不理想,但本部分实验对于完整外泌体适配体的筛选仍具有借鉴意义。此外,本课题开发了一种可用于快速检测A549外泌体的试纸条传感器,可检测浓度为6.4×109粒子/mL的外泌体,本课题为外泌体的可视化检测提供了新的方法。
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