禽腺病毒(Fowl Adenovirus,FAdV)系腺病毒科禽腺病毒属成员。根据血清交叉试验及其基因组特征,FAdV被分为12个血清型(1-7,8a,8b,9-11)与5个种(A,B,C,D,E)。FAdV感染一般引起亚临床症状,包涵体肝炎、心包积液以及肌胃糜烂等为急性感染时的主要症状,而引起禽类肝炎-心包积液综合症的主要病原是血清4型禽腺病毒(FAdV-4)。2013年以来,国内多个省份地区鸡群爆发由FAdV-4感染的包涵体肝炎-心包积液综合症,鸡群死淘率达80%。FAdV-4的感染不仅发生于3-4周龄的肉鸡,还发生于10-20周龄的蛋鸡,给国内养禽业造成了巨大的经济损失。然目前尚无针对FAdV-4病毒快速特异性的商品化检测技术及试剂盒。本研究通过FAdV-4病毒SD株免疫Balb/c小鼠,在研制出了 4株针对FAdV-4病毒纤突蛋白2(Fiber2)的单克隆抗体基础上,同时建立了检测FAdV-4病毒的双单抗夹心ELISA检测方法,以期为FAdV-4的快速诊断提供有效、可靠的检测技术。1、抗FAdV-4病毒Fiber2蛋白的单克隆抗体研制及其特性为了获得抗FAdV-4病毒Fiber2蛋白的单克隆抗体,将FAdV-4病毒SD株细胞培养上清免疫7周龄Balb/c小鼠,以纯化的GST-Fiber2蛋白为筛选抗原,通过间接ELISA筛选出4株能够稳定分泌出抗FAdV-4病毒Fiber2蛋白抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为3C2、4A3、5C4和5H6。其中,3C2以及5C4的亚类为IgG2b,4A3的亚类为IgG2a,而5H6的亚类为IgM,轻链均为κ链。效价测定表明,4株单克隆抗体的ELISA效价高达1:160000以上。特异性检测表明4株单克隆抗体仅与FAdV-4病毒及其Fiber2蛋白反应,不与FAdV-4病毒的Fiberl蛋白和血清8型禽腺病毒(FAdV-8)反应。值得一提的是,研究还发现3C2单抗不仅具有中和FAdV-4病毒感染能力,而且能在病毒感染以及Fiber2真核表达情况下有效免疫沉淀Fiber2蛋白。4株抗FAdV-4病毒Fiber2蛋白单抗的成功获得为研制FAdV-4快速诊断试剂盒及探究Fiber2蛋白在FAdV-4病毒致病机制中的作用奠定了基础。2、检测FAdV-4病毒的双单抗夹心ELISA方法建立为了研制出一种针对FAdV-4的抗原快速、准确的检测方法,将抗FAdV-4病毒Fiber2蛋白的3株IgG类特异性单克隆抗体两两配对,以期研制出FAdV-4双抗体夹心ELISA抗原检测试剂盒。筛选结果表明,将4A3作为ELISA捕获抗体进行包被,HRP酶标的3C2作为ELISA检测抗体效果最佳。特异性试验证明该ELISA仅与FAdV-4病毒反应,不与所检测的FAdV-8,马立克氏病病毒(MDV),小鹅瘟病毒(GPV),H9型禽流感病毒(H9N2),鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV),禽网状内皮组织增生症病毒(REV)以及禽白血病病毒(ALV)反应。灵敏度检测表明该ELISA对FAdV-4检测灵敏度可达1000个TCID50。对纯化的GST-Fiber2蛋白检测灵敏度可达1.25 ng。临床样品检测发现该ELISA能从自然感染鸡的肝脏组织中有效检测出FAdV-4病毒。以上数据表明本研究构建的双单抗夹心ELISA方法对FAdV-4病毒感染的诊断具有良好的应用前景。