CD147是免疫球蛋白超家族(IgSF)的一个成员,是一种新发现的细胞表面黏附因子。作为一种跨膜蛋白,CD147广泛表达于上皮细胞,内皮细胞,参与到许多的生理和病理过程,与肿瘤细胞的表达、精子发育,神经系统功能调节等密切相关,特别是在肠道疾病中,CD147促进上皮细胞和基质细胞产生大量的基质降解酶,这些基质降解酶在肠道炎症和癌症中起重要作用。为了研究CD147在家兔体内是否具有同样的功能,我们克隆了家兔CD147基因,并得到了相应的融合蛋白,试验分两个部分。一、家兔CD147基因的克隆、序列分析与结构预测。利用同源序列克隆原理设计一对克隆引物,对家兔十二指肠黏膜组织提取的总RNA进行RT-PCR,将PCR产物与pMD19-T载体连接后转化E.coli JM109感受态细胞,筛选阳性克隆、测序,并进行序列分析与结构预测;结果成功克隆了兔CD147基因,并注册到GenBank(Accession.EU650668),克隆的兔CD147基因包含一个完整的开放阅读框架,全长为810bp,编码由270个氨基酸残基组成的CD147前体蛋白,推导的氨基酸序列信号肽为第1～16个氨基酸。氨基酸序列与牛、人、褐鼠、野猪的同源性分别为62.5%,65.9%,59.5%和66.3%,三级结构预测表明CD147具有两个免疫球蛋白类似区。二、家兔CD147基因的原核表达。根据克隆序列设计一对表达引物,用PCR法从重组克隆载体中扩增出含BamHI/ HindⅢ酶切位点的CD147片段,双酶切后亚克隆至pET32a﹙+﹚载体,构建重组原核表达载体pET32a﹙+﹚～CD147,转化宿主菌E.coli BL21,经IPTG诱导进行表达,SDS-PAGE鉴定。结果成功构建了原核表达载体pET32a﹙+﹚～CD147,表达的融合蛋白分子量约为49.45kDa,并以包涵体形式存在。为进一步研究家兔CD147的生物学功能奠定了基础。