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第一部分 细胞外信号调节激酶在大鼠局灶性脑缺血中的表达 目的:建立大鼠可逆性大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,观察局灶性脑缺血不同再灌注时间段神经行为学、脑梗死体积、组织学变化、神经元凋亡和ERK表达的动态变化规律。 方法:将70只体重为250～300克健康雄性成年Wistar大鼠,随机分成假手术组(sham组)、脑缺血再灌注组(ischemia-reperfusion,I/R组);采用改良的线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞2h再灌注3h、6h、24h、48h、72h模型。I/R组每个时间段各9只鼠,sham组各5只。在预定时间点进行神经行为学评分;脑梗死体积测定;HE染色观察组织学变化;免疫组织化学方法研究海马CA1区ERK的活性特征;TUNEL法检测细胞凋亡的动态变化规律。 结果:1) sham组各时间段神经行为学评分均为0分;I/R组于再灌注早期(3h～6h)大鼠神经功能缺损症状较重,于再灌注48h后症状明显减轻;72h时,大部分大鼠已无明显神经功能缺失症状。2) Trc染色检测脑梗死体积,Sham组脑片均红染,无白色梗死灶形成。I/R组再灌注3h时即可见明显梗死灶:至再灌注24h梗死体积已达高峰;72h时梗死灶仍存在,但梗死体积较24h已有减小。3) HE染色显示sham组可见大鼠神经元数量多,排列整齐,形态完整;I/R组有神经元细胞肿胀,分布不均,细胞周围间隙增宽,有的细胞体积缩小,核固缩深染。4) ERK活性表达于再灌注后3h明显增加,再灌注后6h达到高峰,72h恢复到正常水平。除72h I/R组ERK活性表达与sham组比较无显著差异外,其余I/R组ERK活性表达较sham组均有明显增加。5) 缺血再灌注组3h开始即出现染色为黄色的凋亡细胞,随缺血时间延长,凋亡细胞增多,并有细胞核固缩、凋亡小体等凋亡中晚期形态特征出现。凋亡细胞数于48h达到高峰:72h以后凋亡细胞数逐渐减少。I/R组各时间段凋亡细胞数与sham组比较均有显著性差异。 结论:脑缺血再灌注损伤可能导致ERK活性上调,参与缺血后神经细胞凋