从麻黄草质茎中分离出5种内生真菌。经初步筛选,得到可能产生物碱的菌株Mh3和Mh5。进一步筛选发现,麻黄内生真菌Mh5产生物碱能力较高,以此作为供试菌株,对其做了进一步的研究。 对薄层层析检测方法进行了筛选,发现用氯仿:甲醇:氨水(20:5:0.5)作为展开剂,用0.5%的茚三酮乙醇溶液作为显色液,喷洒后加热显色是较为理想的检测条件。 对麻黄生物碱提取方法进行了选择和优化,得出在工业提取法的框架下,用氯仿作为萃取剂在40℃左右进行提取的效果最好。 Mh5提取物的薄层扫描结果显示,提取物、盐酸麻黄碱标准品和盐酸伪麻黄碱标准品的吸收曲线相近;红外光谱检测和核磁共振检测结果表明,其产生的次生代谢物属于麻黄生物碱,还可能是麻黄碱和伪麻黄碱的混合物。 适宜菌丝体生长的固体培养基是PDA和豆芽汁培养基;利于麻黄生物碱产生的液体培养基以合成培养基为最佳。利用液体培养基对其中的碳、氮源进行了筛选,结果显示,对于菌丝生长和生物碱的产生来说,蔗糖和硫酸铵分别是较理想的碳源和氮源。 通过正交实验优化了Mh5的发酵条件,得出适宜菌丝体生长的培养条件为:蔗糖20g/L,硫酸铵1.5g/L,pH为7.0左右,培养温度为30℃;有利于生物碱产生的培养条件是:蔗糖40g/L,硫酸铵4.5g/L,pH为5.5左右,培养温度为25℃。 对内生真菌Mh5进行了菌种鉴定,其在分类学上的地位为真菌门,半知菌亚门,丝孢纲,丛梗孢目,暗梗孢科,砖隔孢亚科,交链孢霉属(Alternaria Nees ex Wallr.)。