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背景:类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种发病机制目前还未十分明确的严重自身免疫性疾病,症状表现为持久或反复发作的滑膜炎、软骨和骨破坏造成的关节畸形,其病因可能与遗传、感染和环境等因素有关。近年来壮医以其独特的理论体系和明显的疗效越来越得到人们重视,临床上也开始逐步推广,壮药龙钻通痹方是壮医防治RA的经典“解毒”方剂,临床和实验研究发现,壮药龙钻通痹方可以显著改善RA临床症状、调节多种细胞因子表达。因此,充分发掘我国传统民族医学的优势,深入研究壮药龙钻通痹方的防治RA的作用特点及相关机制,对开发出能安全高效防治RA的药物具有关键的导向作用。目的:利用CIA大鼠模型评价壮药经典方剂龙钻通痹方防治RA的有效性,并从炎症因子表达调控角度,探讨壮药龙钻通痹方治疗RA的作用机制,为阐明壮医“毒虚致百病”及“三道两路”理论的现代内涵提供理论和实验依据。方法:1.通过检索 Pubmed、Embase、Cochrane Library、CBM、CNKI 等数据库,开展壮药龙钻通痹方或壮药龙钻通痹方联合其他药物治疗RA的文献研究,利用meta分析,评价壮药龙钻通痹方防治RA的有效性。2.构建CIA大鼠模型,随机分成5组(n=10),分别为:阳性药组(MTX组)、模型组以及壮药龙钻通痹方高、中、低剂量给药组,其中壮药龙钻通痹方各组每日灌胃给药,连续给药30d。另取10只SD大鼠作为正常对照组。利用关节炎指数(AI)评价壮药龙钻通痹方对CIA大鼠的炎症缓解情况;利用HE染色观察分析壮药龙钻通痹方对关节炎性细胞浸润、滑膜增生、骨和软骨破坏以及血管翳形成的影响;利用Micro-CT进行影像学分析,评价壮药龙钻通痹方对CIA大鼠关节骨表面损伤的抑制作用;利用Luminex多因子检测技术分析壮药龙钻通痹方对CIA大鼠血清中细胞因子(CK)水平的影响;通过分析体重变化、各脏器系数及组织病理学切片评价壮药龙钻通痹方对CIA大鼠各系统及脏器的影响。3.利用网络药理学方法筛选壮药龙钻通痹方防治RA相关信号通路;利用western blot验证NF-κB信号通路中关键因子NF-κB p65的蛋白质表达及其磷酸化水平;利用计算机模拟分子对接,以NF-κB关键因子为靶标,筛选壮药龙钻通痹方调控炎症因子表达的可能活性成分。结果:1.筛选6篇符合标准的文献进行meta分析。结果表明,壮药龙钻通痹方治疗RA有效性的合并最终效应量为2.31,95%的CI为(1.41,3.77),Z=3.34,P<0.05;壮药龙钻通痹方治疗RA血沉的合并最终效应量为-8.80,95%的CI为(-14.11,-3.50),Z=3.25,P<0.05;壮药龙钻通痹方治疗RA不良反应发生率的合并最终效应量为0.59,95%的CI为(0.26,1.37),Z=1.23,P>0.05。2.壮药龙钻通痹方可明显的降低RA发病率和AI评分;改善CIA大鼠关节内炎性细胞浸润、滑膜增生、骨和软骨破坏以及血管翳形成;降低BS和BS/BV值;升高血清中IL-10的表达水平,降低血清中IL-1β和IL-17A的表达水平。另外,组织病理切片显示壮药龙钻通痹方对肝脏、肾脏、睾丸无明显的影响,与正常对照组相比,体重正常增长,且心、肝、脾、肺、肾、睾丸的脏器系数均无明显差异。3.利用TCMSP数据库(OB≥30%,DL≥0.18)从壮药龙钻通痹方的八味药化合物中筛选出共76个活性化合物。经Uniprot数据库预测,共预测出54个RA靶点,其中IL-10、IL-6和MMP-9等为关键靶点。GO富集分析和KEGG通路分析结果显示壮药龙钻通痹方主要参与有毒物质的反应、营养水平的反应和肌肉细胞增殖等生物过程,通过调控PI3K/Akt、T cell receptor和NF-κB等为主的信号通路发挥治疗RA的作用。并且研究发现高剂量组的壮药龙钻通痹方可明显降低CIA大鼠关节滑膜组织中的NF-κB p65蛋白质表达和磷酸化水平。利用分子对接技术筛选发现,壮药龙钻通痹方药物组成中的小分子 coptisine(molecule name)和 hederagenin(molecule name)分别与 NF-κB p65和NF-κB抑制蛋白IκB-α有较好的结合力。因此,推测两面针中的小分子coptisine和鸡血藤中的小分子hederagenin可能是壮药龙钻通痹方调控RA免疫炎症分子靶点NF-κBp 65和IκB-α的可能活性成分。结论:1.壮药龙钻通痹方是壮医防治RA的经典方剂。临床应用中已证实壮药龙钻通痹方或壮药龙钻通痹方联合其他药物治疗RA是一种安全有效的治疗策略。为进一步规范和推广壮药龙钻通痹方的临床应用,仍需要更为系统的临床与实验动物的有效性与安全性评价研究。2.壮药龙钻通痹方可以改善CIA大鼠关节表面肿胀,抑制CIA大鼠关节内炎性细胞浸润、滑膜增生、骨和软骨破坏以及血管翳形成,防止骨表面损伤,充分发挥了“调虚解毒,通龙路火路”以治疗RA的功效。3.壮药龙钻通痹方可通过降低CIA大鼠血清中IL-17A和IL-1β含量并同时升高IL-10含量,发挥干预RA炎症反应的目的。4.壮药龙钻通痹方可能通过调控NF-κB、PI3K/Akt、HIF-1、T cell receptor、JAK-STAT、VEGF、MAPK、Th17 cell differentiation、Toll-like receptor等 9 条信号通路,发挥其免疫调节作用。5.NF-κB p65可能是壮药龙钻通痹方调控NF-κB信号通路发挥调节免疫炎症反应作用的分子靶点,并且两面针中的小分子coptisine和鸡血藤中的小分子hederagenin可能是结合NF-κB p65和IκB-α的活性成分。