【摘 要】
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皮肤受到烧伤、创伤后,为了防止微生物侵入,维持内环境稳定,促进伤口的愈合,需要敷料覆盖创面。创面敷料要求具备良好的生物相容性、机械性能、透气性能以适应人体生理的需求。蚕丝蛋白不仅具备创面敷料所具有的基本性能,还因其易降解,有利于细胞粘附和生长以及易加工和修饰性等优点作为生物敷料而受到关注。本试验开展以下四个方面的研究(1)桑蚕丝胶-柞蚕丝素生物敷料(Bombyx mori Sericin-Anth
【基金项目】
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广东省科技计划项目:国家蚕桑产业技术体系:粤西综合试验站(CARS-22-SYZ17); 公益性得业(农业)科研专项经费:蚕桑高值化加工利用技术及设备(201403064)
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皮肤受到烧伤、创伤后,为了防止微生物侵入,维持内环境稳定,促进伤口的愈合,需要敷料覆盖创面。创面敷料要求具备良好的生物相容性、机械性能、透气性能以适应人体生理的需求。蚕丝蛋白不仅具备创面敷料所具有的基本性能,还因其易降解,有利于细胞粘附和生长以及易加工和修饰性等优点作为生物敷料而受到关注。本试验开展以下四个方面的研究(1)桑蚕丝胶-柞蚕丝素生物敷料(Bombyx mori Sericin-Antheraea pernyi Silk Fiborin Biological Dressing,BS-ASF-BD)制备的最佳配方和成膜条件;(2)研究添加桑叶粉及柞蚕短纤维对生物敷料性能的影响;(3)对BS-ASF-BD的结构和形态进行分析;(4)采用两种方法制备了抗菌BS-ASF-BD,为丝素蛋白在皮肤创伤修复生物材料的研制和开发提供一种新的途径,取得如下结果:1.筛选出BS-ASF-BD的最优配方组合。以溶失率为衡量指标评价成膜效果,溶失率越低,成膜效果越好。首先通过单因子试验得出单因素条件下的最优组合:丝胶与丝素体积比为2:1,聚乙二醇200浓度为40%,明胶浓度为20%;然后在此基础上进行三因素三水平的正交试验,得出BS-ASF-BD的最佳配方组合为:丝胶与丝素体积比为2:1;聚乙二醇200浓度为40%,明胶浓度为20%,在此配方下BS-ASF-BD的溶失率为59.19±1.23%。2.筛选出BS-ASF-BD的最优成膜条件。首先,研究不同温度对BS-ASF-BD的溶失率和强伸力的影响,结果表明在45℃条件下放置处理48h,BS-ASF-BD溶失率为40.60%,断裂强度为32.13Kpa,断裂伸长率为48.78%。其次,研究不同乙醇浓度对成膜性的影响,结果表明BS-ASF-BD经24h常温成膜后,再用100%乙醇溶液处理24h,溶失率可降低至34.62%,断裂强度上升至57.88KPa,断裂伸长率为34.15%。3.柞蚕短纤维-桑蚕丝胶-柞蚕丝素生物敷料(ASF-BS-ASF-BD)的制备。首先制备柞蚕短纤维,通过单因素试验和正交试验得出HCl、Na OH、FeCl3三种溶液制备短纤维的最佳条件,以柞蚕丝溶解率、短纤维长度、形态作为评价指标。HCl的最佳溶解条件是温度90℃、浓度3mol/L、时间40min,该条件下柞蚕丝溶解率是0.40mg/m L,短纤维长度主要分布在100μm至250μm之间,为细长的短杆状;Na OH的最佳溶解条件是温度85℃、浓度16mol/L、时间20min,柞蚕丝素溶解率是0.31mg/m L,短纤维形状呈无规则的片状;FeCl3的最佳溶解条件是温度105℃、浓度0.18mol/L、时间5h,柞蚕丝溶解率是0.67 mg/m L,短纤维长度主要分布在50μm至125μm之间,形状为细长的短杆状,两端的切口平整。综合比较柞蚕丝溶解率、短纤维长度和形态,确定用FeCl3制备短纤维。然后将柞蚕短纤维添加到BS-ASF-BD当中,结果得出,添加0.6%短纤维,所制得的ASF-BS-ASF-BD的溶失率最低为62.49%,断裂伸长率为37.04%、断裂强度为10.78KPa。4.桑叶粉-桑蚕丝胶-柞蚕丝素生物敷料(MLP-BS-ASF-BD)的制备。添加0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%桑叶粉制备MLP-BS-ASF-BD,结果表明,当桑叶粉添加量为1%时MLP-BS-ASF-BD溶失率最低,为54.82%,断裂伸长率为38.74%、断裂强度为8.16KPa。5.BS-ASF-BD表面形态及结构分析。采用电子扫描显微镜观察BS-ASF-BD的表面形态,膜表面有凹陷和突起以及分布不匀的孔隙。红外光谱法测定BS-ASF-BD二级结构,结果表明BS-ASF-BD的二级结构主要由β折叠、β转角、无规卷曲组成,三者的含量分别为37.29%、27.77%、14.67%,其中β折叠含量在三者中最高,三者含量占总含量的79.73%。X-射线衍射法测定BS-ASF-BD结晶结构,结果表明BS-ASF-BD结晶结构以SilkⅡ型为主。6.制备了抗菌BS-ASF-BD。研究包埋法、吸附法两种制备方法以及溶菌酶、抗菌肽两种抗菌添加物对BS-ASF-BD抑菌效果的影响,采用抑菌圈法检测抗菌效果。结果表明用吸附法制备的溶菌酶-BS-ASF-BD抗菌效果优于包埋法制备的溶菌酶-BS-ASF-BD。抗菌肽-BS-ASF-BD的抑菌效果优于溶菌酶-BS-ASF-BD的抑菌效果,抗菌肽-BS-ASF-BD对金黄色葡萄球菌的最大抑菌圈为3.93mm,而溶菌酶-BS-ASF-BD的最大抑菌圈为3.72mm;抗菌肽-BS-ASF-BD对大肠杆菌最大抑菌圈为3.55mm,而溶菌酶-BS-ASF-BD的最大抑菌圈为3.41mm。
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