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脆性X综合征(Fragile X syndrome，FXS)是一种常见的遗传性智力低下疾病，其致病相关基因----脆性X智力低下基因1(Fragile X mental retardation gene1,FMR1)、脆性X相关基因-1(Fragile X-related gene1, FXR1)和脆性X相关基因-2(Fragile X-related gene2, FXR2)构成了脆性X基因家族。这三个基因各自对应的编码蛋白脆性X智力低下蛋白(Fragile X mental retardation protein, FMRP)、脆性X相关蛋白1(Fragile X related protein1,FXR1P)和脆性X相关蛋白2(Fragile Xrelated protein2, FXR2P)则组成了脆性X蛋白家族。由于该蛋白家族成员在结构上均具有精氨酸甘氨酸簇(RGG box, RGG盒)和核蛋白K同源结构域(KH结构域)等RNA结合结构域，因而它们均属于RNA结合蛋白(RNAbinding protein, RBP)。microRNA (miRNA)是一类大小约18～25nt的小分子非编码RNA，可通过与靶mRNA3’UTR特异性结合来介导翻译，产生特定的生物学效应。对于FXR1P与miRNA及其靶mRNA之间相互作用的研究，有利于从RNA水平上明确FXR1P在FXS中可能的调节和致病机制。目的：1、筛选与FXR1P相关的miRNA。2、验证筛选得到的miRNA与预测靶mRNA之间的关系。方法：1、在人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)中采用RNA结合蛋白免疫沉淀(RNA-binding protein immunoprecipitation, RIP)技术捕获与FXR1P结合的miRNA，对其进行加头、加尾、逆转录、PCR扩增和连接转化等处理后，获得与FXR1P相关的miRNA。2、运用生物信息学数据库TargetScanHuman、microRNA和miRWalk预测筛选miRNA可能作用的靶标。3、构建含靶mRNA3’UTR的双荧光素酶报告基因载体psiCheck-2-mRNA3’UTR，并通过酶切和测序加以验证。4、将构建成功的重组载体psiCheck-2-mRNA3’UTR与人工合成的miRNA mimics共转染人胚肾上皮细胞(Human embryonic kidney epithelial cell，293T细胞)后，检测报告基因的相对荧光素酶活性，以明确miRNA与预测靶标之间的对应关系。结果：1、筛选获得3个与FXR1P相关的miRNA：miR-323a-3p、miR-19b-3p和miR-1252-5p。2、利用生物信息学数据库预测确定胞嘧啶单核苷酸-N-乙酰神经氨酸合成酶(Cytidine monophosphate-N-acetylneuraminic acid synthetase, CMAS)为miR-323a-3p的候选靶标。3、酶切和测序结果显示成功构建了双荧光素酶报告基因重组载体psiCheck-2-CMAS3’UTR。4、共转重组载体psiCheck-2-CMAS3’UTR和miRNA-323a-3p mimics至293T细胞后，miR-323-3p过表达组的荧光素酶活性显著低于阴性对照组(P<0.05)。结论：1、筛选获得3个与FXR1P相关的miRNA：miR-323a-3p、miR-19b-3p和miR-1252-5p。2、CMAS是miR-323a-3p的靶基因。