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目的:我们通过热灼伤破坏角膜缘组织,观察在角膜上皮干细胞缺失情况下,角膜上皮损伤修复过程。
方法:健康成年家兔40只,雌雄不限,体重2.0~2.5Kg,实验分为四组,即甲组:单纯全角膜上皮刮除组;乙组:全角膜上皮刮除伴角膜缘处球结膜缺损组;丙组:乙组实验基础上伴部分角膜缘组织缺损组;丁组:乙组实验基础上伴全周角膜缘组织缺损组,每组10只家兔。同一只动物的左、右眼分别为健眼和实验眼。使用前检查无眼部疾患。术后定期用2﹪红汞染色、裂隙灯检查,并详细记录角膜上皮愈合,角膜新生血管生长及角膜并发症的产生情况。分别于术后2、3、4、5天(实验甲组及乙组),1、5、8、14天(实验丙组及丁组)用空气栓塞处死动物,取出角膜,置于10﹪福尔马林溶液固定。然后经过乙醇脱水、石蜡包埋、作横切面半薄切片,厚度约4um,HE染色,光学显微镜观察。用计算机图像分析,数据以x±s表示,并进行t检验。
结果:实验甲组(单纯全角膜上皮刮除组)及乙组(全角膜上皮刮除伴角膜缘处球结膜缺损组)经2﹪红汞染色,见刮除之角膜着色面积逐渐缩小,平均分别于4.0及4.5天角膜上皮全部修复。角膜上皮愈合时间最短。进行t检验两组间无显著性差异(p>0.05)。实验丙组(乙组实验基础上伴部分角膜缘组织缺损组)于术后一周左右伴随少量浅层新生血管形成,角膜上皮细胞呈向心性生长,愈合后角膜透明。平均愈合时间8.5天,较甲组延长。进行t检验两组间有高度显著性差异(p<0.01)。实验丁组(乙组实验基础上伴全周角膜缘组织缺损组)从术后第二天开始见角膜基质层均有不同程度混浊,周围结膜水肿,平均术后一周新生血管开始长入,二周左右,所有角膜均出现不同程度浅层新生血管、上皮持续性缺损等临床表现。角膜上皮平均愈合时间最长,为16天。与实验甲组进行t检验两组间有高度显著性差异(p<0.01)。
结论:促进角膜上皮再生的干细胞—角膜上皮干细胞位于角膜缘,即角膜缘干细胞是角膜上皮增生和分化的基础。