朝医方苏子导痰汤通过wnt5a信号通路对哮喘小鼠气道重塑的影响

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目的:观察朝医方苏子导痰汤对哮喘小鼠气道重塑的影响,并且研究其作用机制是否与wnt5a信号通路相关。方法:将50只清洁级雌性的BALB/c小鼠,随机分为正常组、哮喘小鼠模型组、朝医方苏子导痰汤低剂量组、朝医方苏子导痰汤高剂量组、西药地塞米松阳性对照组。在第1、7、14、15天(为了加强致敏效果)对除正常组以外其余四组进行致敏,致敏结束后开始雾化激发,激发共计8周,每周3次。在雾化激发的同时进行灌胃治疗,除正常组和模型组使用生理盐水代替药物灌胃,其余三组治疗组分别使用相应剂量和浓度药物治疗:苏子导痰汤高剂量组200μL/只,浓度为300 mg/kg;苏子导痰汤低剂量组200μL/只,浓度为150 mg/kg;西药地塞米松组200μL/只,浓度为0.5 mg/kg,共计8周,每天1次。在最后一次激发结束1小时后,立即将小鼠处死。取小鼠的BALF、左肺组织、右肺组织,存放到相应合适地点保管,以备实验使用。对取到的左肺组织进行切片,采用HE、Masson染色法研究肺组织病理变化;利用乙酰胆碱检测小鼠的气道高反应性;采用ELISA法检测与哮喘相关的细胞因子的含量;分别采用IH和Western Blot方法检测α-SMA的蛋白含量以及右肺组织中wnt5a和NF-κB磷酸化的蛋白表达。结果:1.BALF结果:同正常组相比,模型组BALF中含有大量炎性细胞;与模型组比较后发现,其余三组治疗组中的BALF炎性细胞总数以及分类计数均有下降,各治疗组同模型组相比改善明显(P<0.05)。2.ELISA检测结果:同正常组相比,模型组BALF中细胞因子(IL-4、IL-5、IL-13)含量均有不同程度的升高,与此同时IFN-γ有所降低(P<0.05);与模型组比较,其余三组BALF中细胞因子(IL-4、IL-5、IL-13)含量与模型组相比有所降低,而IFN-γ含量则存在升高现象(P<0.05),各治疗组同模型组相比改善明显。3.HE染色结果:同正常组相比,模型组支气管粘膜存在大面积的炎性细胞浸润,存在破坏的肺泡等肺损伤现象(P<0.05);与模型组比较后发现,其余三组治疗组的肺损伤都有相应程度的改善,各治疗组同模型组相比改善明显(P<0.05)。4.改良Masson三色染色结果:同正常组相比,模型组气道存在大面积的胶原纤维以及气道平滑肌增厚的现象(P<0.05);与模型组比较后发现,其余三组治疗组的胶原纤维面积以及气道增厚表现有相应的减轻(P<0.05),各治疗组同模型组相比改善明显。5.气道高反应性测定结果:同正常组相比,模型组的气道阻力值在不同浓度乙酰胆碱的作用下,气道阻力值都显著增高(P<0.05);与模型组比较后发现,其余三组治疗组在药物干预下,气道阻力值均有一定程度的下降(P<0.05),各治疗组同模型组相比改善明显。6.IH结果:同正常组相比,模型组的切片中存在大量的细胞被染成棕黄色(P<0.05);与模型组比较后发现,其余治疗组中的黄棕色细胞存在颜色差异(P<0.05)。7.Western Blot结果:同正常组相比,模型组中的α-SMA的蛋白含量升高明显(P<0.05);与模型组比较后发现,其余三组治疗组的蛋白含量呈递减趋势(P<0.05)。同正常组相比,模型组中的wnt5a和磷酸化的NF-κBp65蛋白表达有着一定程度的升高(P<0.05);与模型组比较后发现,其余三组治疗组的蛋白表达水平的降低,呈现出递减的趋势(P<0.05)。结论:朝医方苏子导痰汤对哮喘小鼠气道重塑存在一定的抑制作用,并且它的作用机制与wnt5a信号通路有联系。
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