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微生物产生的腈水合酶是催化丙烯腈生成丙烯酰胺的重要生物催化剂。它的反应条件温和、产率高、副产物少、产物的自聚率低、具有区域和立体选择性,可广泛地应用于氨基酸、酰胺、羧酸及其衍生物的合成。本文通过PCR扩增得到诺卡氏菌的腈水合酶基因。先是构建了BL21-pGEX-4T-1/NHase重组菌,表达GST-NHase融合蛋白。但是由于GST的相对分子质量较大,阻碍了腈水合酶的β亚基与α亚基的正确结合,从而使腈水合酶表现不出酶活。利用凝血酶对纯化后的GST-NHase融合蛋白进行酶切,酶切产物先后经