卡托普利、心复康口服液对心衰大鼠心肌细胞凋亡和线粒体膜电位的影响

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目的:本课题通过部分缩窄大鼠的腹主动脉复制出大鼠充血性心力衰竭(congestive heart failure,CHF)模型,来研究压力负荷性心衰大鼠心功能、线粒体膜电位、心肌细胞凋亡及相关基因Bcl-2和Bax表达的变化,研究卡托普利、心复康口服液在心力衰竭发展过程中的干预作用及其可能的作用机制。方法:采用腹主动脉部分缩窄术制作充血性心力衰竭大鼠模型,将80只SD大鼠随机平均分为假手术组(Sham operation, SH)、腹主动脉缩窄模型组(Coarctation of abdominal aorta, CAA)、卡托普利治疗组(Captopril intervention, CAP)、心复康口服液治疗组(XinfuKang Koufuye, XFK)四组。造模术后1周开始灌胃,各组均为1次/日。CAP组:卡托普利剂量10mg.kg-1.d-1,生理盐水4ml溶解后灌胃。XFK组:心复康口服液剂量10mg.kg-1.d-1,加生理盐水至4ml后灌胃。SH组和CAA组以同样方法给予生理盐水4ml/只。分别于灌胃后第6周、第10周测量心衰大鼠心功能各指标:体重(BW)、心率(HR)、动脉收缩压(SAP)、动脉舒张压(DAP)、左室重量指数(LVMI)、左室舒张末压(LVEDP)、收缩期左心室内压上升的最大变化速率(+dp/dtmax)、舒张期左心室内压下降的最大变化速率(-dp/dtmax)的变化。应用流式细胞仪,以罗丹明-123为荧光探针测定心衰大鼠线粒体膜电位(Mitochondrial transmembrane potential, MMP)变化,采用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的磷脂结合蛋白V(AnnexinV)与碘化丙啶(PI)双染法检测心衰大鼠心肌细胞早期凋亡率,用Bax、Bcl-2小鼠单克隆抗体测定相关凋亡基因Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果:(1)各组心功能的变化:6周与10周结果均显示,CAA组与SH组相比,SAP、DAP、HR、LVEDP、LVMI显著升高(P<0.01),+dp/dtmax、-dp/dtmax显著降低(P<0.01), CAP组、XFK组与CAA组相比,HR、SAP、DAP、LVMI、LVEDP显著降低(P<0.01),+dp/dtmax、-dp/dtmax显著增高(P<0.01),XFK组与CAP组相比,各指标无统计学意义(P>0.05)。10周时与6周时心功能相比,SH组无明显变化(P>0.05)。CAA组大鼠LVMI、LVEDP较6周时升高(P<0.05),+dp/dtmax、-dp/dtmax较6周时显著下降(P<0.01)。CAP组HR、LVMI、SAP、LVEDP下降(P<0.05),-dp/dtmax升高(P<0.05),+dp/dtmax显著升高(P<0.01)。XFK组HR、LVMI、LVEDP下降(P<0.05) , +dp/dtmax显著升高(P<0.01) ,-dp/dtmax无明显变化(P>0.05)。(2)各组心肌细胞凋亡和MMP的变化:6周与10周结果均显示,CAA组较SH组细胞凋亡率显著升高(P<0.01),MMP显著下降(P<0.01),CAP组、XFK组较CAA组细胞凋亡率显著降低(P<0.01),MMP显著升高(P<0.01)。10周时与6周时心肌细胞凋亡和MMP相比,CAP组细胞凋亡率显著降低(P<0.01),线粒体膜电位明显升高(P<0.01),SH组、CAA组、XFK组无明显变化(P>0.05)。(3)各组Bcl-2、Bax蛋白表达及Bcl-2/Bax比例的变化:6周与10周结果均显示,CAA组较SH组Bcl-2蛋白表达显著下降(P<0.01),Bax蛋白表达显著升高(P<0.01),Bcl-2/Bax比例显著下降(P<0.01)。CAP组、XFK组较CAA组Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.01),Bax蛋白表达显著降低(P<0.01),Bcl-2/Bax比例显著升高(P<0.01),XFK组较CAP组Bcl-2/Bax比例无明显差异(P>0.05)。10周时与6周相比,CAA组Bcl-2/Bax比例显著降低(P<0.01),CAP组和XFK组Bcl-2/Bax比例显著升高(P<0.01),SH组无明显变化(P>0.05)。结论:(1)缩窄腹主动脉可明确造成大鼠充血性心力衰竭模型,随时间的延长,大鼠心衰加重,心功能明显减低。(2)卡托普利能增加Bcl-2蛋白的表达,降低Bax蛋白的表达,上调Bcl-2/Bax比率,稳定线粒体膜电位,抑制心肌细胞凋亡、逆转心室重构,改善心功能。(3)心复康口服液能增加Bcl-2蛋白的表达,降低Bax蛋白的表达,上调Bcl-2/Bax比率,稳定线粒体膜电位,抑制心肌细胞凋亡,治疗心力衰竭。
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