以11H苯[a]咔唑为母体新型荧光试剂的制备及在高效液相色谱中应用研究

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高效液相色谱(HPLC)因其强大的分离分析能力已被广泛应用于化学、生物化学、临床医学、药物学、神经生物学及食品卫生、环保检测、质量控制等许多研究和应用领域。然而,由于样品中被测组分本身性质及其低含量的限制,并非所有化合物都可直接用于液相色谱分析。荧光检测具有很高的灵敏度,利用荧光标记技术使本身不发荧光的化合物(如脂肪酸、脂肪胺、氨基酸等)转化成发射荧光的衍生物,从而实现高灵敏荧光检测。本文重点研究了几种以11H-苯[a]咔唑为母体荧光标记试剂的合成和表征,考察了荧光标记试剂的光谱性质,优化了衍生反应条件、色谱分离条件,并将建立的方法应用于不同实际样品的分析中。具体工作内容如下:第一章:介绍了荧光原理及荧光标记法。简述了高效液相色谱的发展及其基础知识。分析总结了荧光试剂衍生法的研究概况。第二章:三种荧光标记试剂:2-(11H-苯[a]咔唑)乙基氯甲酸酯(BCEC-Cl)、2-(11H-苯[a]咔唑)乙基对甲苯磺酸酯(BCETS)、2-(11H-苯[a]咔唑)异丙基基氯甲酸酯(BCPC-Cl)的设计合成、结构表征和光谱性质研究。第三章:两种荧光标记试剂BCEC-Cl和BCPC-Cl分别用于脂肪胺的高效液相色谱-质谱分析。通过对衍生化条件和色谱分离条件的优化,建立了脂肪胺的柱前衍生化高效液相色谱荧光检测法,并将方法应用于虾酱等实际样品的测定。结果表明,衍生反应条件温和,衍生产率高,该方法的线性范围宽,重现性好,灵敏度高。第四章:2-(11H-苯[a]咔唑)乙基氯甲酸酯(BCEC-Cl)用于氨基酸的高效液相色谱-质谱分析。建立了BCEC-Cl荧光标记液相色谱分析法,实现了氨基酸类标记,采用二十种氨基酸的BCEC-Cl柱前衍生荧光检测法实现了牛血清白蛋白和油菜蜂花粉中氨基酸的测定。第五章:荧光标记试剂BCETS用于脂肪酸的高效液相色谱-质谱分析。通过对衍生化条件和色谱分离条件的优化,建立了脂肪酸的柱前衍生化高效液相色谱荧光检测法,并将方法应用于土壤、苔藓样品的测定,实现了这些样品中脂肪酸的高灵敏检测。
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