MICA在人卵巢癌顺铂耐药细胞SKOV3/CDDP的表达及其对NK细胞杀伤作用的影响

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目的:本研究通过检测NK细胞主要活化型受体NKG2D的活化型配体MICA在人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞SKOV3和其顺铂耐药细胞SKOV3/CDDP的表达水平及其对NK细胞杀伤活性的影响,探讨卵巢癌耐药与NK细胞免疫的相关性,为卵巢癌的免疫治疗提供理论依据。方法:1体外复苏人卵巢浆液性乳头状腺癌亲本细胞SKOV3及其顺铂耐药细胞SKOV3/CDDP,37℃,5%CO2饱和温度下的恒温培养箱中培养,连续传代并冻存细胞。2MTT法检测不同浓度的顺铂对人卵巢癌亲本细胞SKOV3及其顺铂耐药细胞SKOV3/CDDP的抑制率,计算半数抑制浓度(IC50)及耐药细胞SKOV3/CDDP的耐药指数。3应用流式细胞术(FCM)检测NKG2D的主要活化性配体MICA在人卵巢癌亲本细胞SKOV3及其顺铂耐药细胞SKOV3/CDDP表面的表达水平。以荧光指数(FI)表示MICA蛋白表达的相对含量。FI=试验样品均道值/对照样品均道值,均道值=lg(X-mode值)×340。4采用Ficoll密度梯度离心法分离健康人外周血单个核细胞(PBMC)。5以健康人外周血单个核细胞(PBMC)作为效应细胞,以人卵巢癌亲本细胞SKOV3及其顺铂耐药细胞SKOV3/CDDP作为靶细胞,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测在不同效靶比(5:1,10:1,20:1,40:1)时,NK细胞对SKOV3及SKOV3/CDDP的杀伤作用。结果:1顺铂对人卵巢浆液性乳头状腺癌耐药细胞SKOV3/CDDP的IC50为35.77mg/L,人卵巢浆液性乳头状腺癌亲本细胞SKOV3的IC50为7.07mg/L;耐药细胞SKOV3/CDDP的耐药指数=35.77/7.07=5.06,可进行耐药试验。2流式细胞术检测结果:流式细胞仪检测NKG2D的主要活化性配体MICA在人卵巢浆液性乳头状腺癌亲本细胞SKOV3及其耐药细胞SKOV3/CDDP表面均有表达,以亲本细胞SKOV3为对照,按公式计算耐药细胞SKOV3/CDDP中MICA蛋白的相对表达量FI值为0.752,即耐药细胞SKOV3/CDDP表面MICA蛋白的表达量约为亲本细胞SKOV3的0.752倍(P<0.05)(Fig.2、Table2)。3NK细胞杀伤活性结果: NK细胞对人卵巢浆液性乳头状腺癌亲本细胞SKOV3及其耐药细胞SKOV3/CDDP的杀伤活性随效靶比的升高而增强,在效靶比5:1时杀伤率分别为(15.50±2.07)%、(10.48±0.95)%;效靶比10:1时杀伤率分别为(32.68±1.42)%、(21.46±1.57)%;效靶比20:1时杀伤率分别为(46.99±3.13)%、(34.21±4.40)%;效靶比40:1时杀伤率分别为(64.00±2.19)%、(55.95±3.47)%,在各效靶比时NK细胞对人卵巢癌亲本细胞SKOV3的杀伤活性均高于对耐药细胞SKOV3/CDDP的杀伤活性,两者相比差异有统计学意义(P<0.05)(Table3)。结论:NKG2D的主要活化性配体MICA在人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞SKOV3和耐药细胞SKOV3/CDDP的表达差异影响NK细胞的杀伤活性,耐药细胞SKOV3/CDDP在耐药的同时发生MICA表达下调,提示肿瘤细胞在发生耐药的同时获得了免疫逃避能力。
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