茶叶与车前子多糖复合物活化巨噬细胞功能的研究

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巨噬细胞是一种非常重要的免疫效应细胞,具有免疫防御、监视、调节等多种免疫功能,通过吞噬微生物和分泌多种细胞因子等功能从而来调控机体的炎症免疫应答,在机体的免疫系统中起尤为重要的作用。巨噬细胞能表达超过数十种受体,产生十多种酶,并能分泌数百种生物活性产物,是体内最为活跃的免疫细胞之一,且其具有强大的吞噬外来异物功能,能主动发生变形运动,吞噬颗粒性外来抗原或分泌细胞因子等直接杀伤病原微生物;还能通过其产生的NO及分泌的肿瘤坏死因子(TNF-α)等分子直接杀伤靶细胞,同时产生具有多种生物活性的物质以发挥其强大的免疫调节作用。自然界中植物种类多种多样,这些天然植物中,具有免疫调节作用的植物也是数量繁多,如果能研究清楚其有效成分的理化性质以及作用机理,对于植物相应功能食品药品的开发将具有非常重要的意义。本研究利用巨噬细胞建立体外实验模型,对茶叶多糖复合物(Tea glycoprotein,TGP)及车前子多糖复合物(Polysaccharide isolated from the seed of Plantago asiatica L., PL-PS)的作用进行了研究,结果如下:1.采用倒置显微镜,瑞士染色法观察细胞形态;用MTT法检测TGP、PL-PS对细胞生长的影响,发现PL-PS, TGP在相应的浓度范围内,对2种巨噬细胞无毒性。同时观察细胞形态,结果发现在形态学表征上,细胞形态和大小表明,这两种多糖对实验用两种巨噬细胞没有毒作用,实验样品可以用做后续实验。2.探讨了不同剂量PL-PS及TGP对RAW264.7和小鼠腹腔巨噬细胞分泌功能的影响。本实验用Griess和ELISA法检测各组RAW264.7和小鼠腹腔巨噬细胞分泌NO和细胞因子的量。结果发现,PL-PS及TGP能够诱导RAW264.7和小鼠腹腔巨噬细胞分泌NO及细胞因子TNF-α、IL-1β.提示,PL-PS及TGP活化RAW264.7和小鼠腹腔巨噬细胞,可能与使其分泌NO及细胞因子有关。3.本实验研究了PL-PS及TGP对RAW264.7和小鼠腹腔巨噬细胞表型及吞噬功能的影响。我们用流式细胞分析术和中性红吞噬实验来分析不同剂量PL-PS和TGP对RAW264.7表面CD80、CD86及CD40表达水平的影响。结果发现PL-PS和TGP均可促进CD80、CD86和CD40的表达。Control组RAW264.7和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红功能很弱,而经不同剂量PL-PS, TGP处理后RAW264.7和小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬活性均明显增强。再次提示PL-PS, TGP可活化巨噬细胞可能与其增强这两种细胞吞噬能力和促进其表面细胞分子表达有关。4.用RT-PCR法对TGP作用后RAW264.7细胞TNF-α、IL-1βmRNA表达的检测表明:各组所提取的总RNA均有β-actin、TNF-α、IL-1βmRNA表达;各组RAW264.7的β-actin mRNA表达基本稳定,可以作为内参;经PL-PS和TGP作用后的RAW264.7 TNF-α、IL-1βmRNA表达量增多。上述结果提示:PL-PS及TGP可促进巨噬细胞CD80、CD86和CD40表面类分子的表达,增强其吞噬功能,NO的分泌及细胞因子TNF-α、IL-1β的分泌。并通过促进巨噬细胞TNF-α、IL-1βmRNA的表达,活化巨噬细胞。提示PL-PS及TGP活化两种巨噬细胞可能与上述实验结果有关。
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