丛梗孢酵母赤藓糖醇产生条件优化的研究

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赤藓糖醇(erythritol)是一种新型食品甜味剂。具有甜味纯正,热量值极低,稳定性高,生物耐受性高及抗龋齿等优点。可作为低能量保健品配料应用于食品生产,并且在医药及化工领域得到应用,表现出良好的应用前景。本实验室前期从蜂蜜样品中分离得到一株丛梗孢酵母(Moniliella sp.),发现具有产赤藓糖醇的能力。本研究的目的在于:考察菌株发酵培养基及发酵条件对赤藓糖醇产量的影响,从而对其产赤藓糖醇的条件进行优化,建立从发酵液中分离提取赤藓糖醇的方法。在丛梗孢酵母赤藓糖醇产生条件优化实验中,首先测定菌体生长曲线,获得最优种子培养基为葡萄糖20 %,酵母膏1 %,在此条件下将培养48 h的种子液用于发酵培养。通过单因素实验,碳源、氮源、无机盐、高浓度NaCl、初始pH值、接种量、温度、发酵时间等因素对赤藓糖醇产量的影响。发现丛梗孢酵母的最适碳源为葡萄糖,浓度为35 %;最适氮源为酵母膏,浓度为1 %;添加磷酸二氢钾、硫酸镁、氯化钙等无机盐可提高赤藓糖醇产量。最适初始pH为5.0,接种量5 %,温度为30℃,发酵9 d。根据单因素试验的结果,设计正交试验,用SPSS软件进行结果分析,表明最优发酵培养基组成为:葡萄糖30 %、酵母膏1 %、CaCl20.2 %,最佳发酵条件为:接种量1 %,发酵培养基初始pH 6.0,30℃摇瓶培养9 d。在此条件下进行发酵试验,赤藓糖醇的产量可达110.61 g/L。在赤藓糖醇分离提纯的实验中,首先通过钝化灭酶、离心去除发酵液中的菌体及大分子蛋白质。其次,采用活性炭脱色,脱色率达97.38 %。经超滤截除蛋白质等大分子物质后,采用阴阳离子交换树脂处理去除发酵液中残留的金属盐离子、色素及多元醇等,试验表明最佳层析条件为:上样量5 mL,洗脱速度1.0 mL/min,收集20~65 min的流出液。对流出液进行组分分析,赤藓糖醇占干物质含量为92.48 %。流出液进一步用旋转蒸发器进行蒸发浓缩,至赤藓糖醇含量为60 g/100 mL以上时,令其缓慢冷却。向浓缩液中加入0.05 %晶核,在10℃下放至24 h,出现结晶。回收母液,重复结晶两次,将晶体过滤、洗涤后干燥、称重,赤藓糖醇的回收率为74.35 %。采用高效液相色谱法检测产品成分,赤藓糖醇纯度为97.62 %。本研究通过单因素和正交试验,阐明了丛梗孢酵母赤藓糖醇产生的最优条件,发现该菌株容易培养,赤藓糖醇产量较高。并初步建立了从发酵液中分离提取赤藓糖醇的方法。为利用丛梗孢酵母进行赤藓糖醇的工业化生产提供了依据。
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