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胚胎移植(Embryo Transfer,ET)技术可以充分发挥良种母牛的繁育潜力,缩短种公牛选育时间,加快牛群质量的改良。用于移植的胚胎按来源可以分为体外受精胚胎、体内受精胚胎和卵母细胞胞质内单精子注射(Intracy to plasmic Sperm Injection,ICSI)胚胎。目前,ICSI技术己经发展较成熟,在诸多物种上获得成功,至今牛卵显微受精后的受精率、卵裂率以及囊胚率仍然偏低。1CSI的成功受到多方面因素影响,包括精子的状态、精子的处理、卵母细胞的状态和操作方式等。本研究首先采用不同精子处理方法、通过注射不同形态的精子和精子尾对牛卵母细胞进行ICSI,通过差异染色和胚胎移植验证胚胎质量,探索不同精子形态及部位对牛ICSI胚胎发育的影响,从而为提高牛ICSI胚胎的发育率和优化ICSI操作技术提供理论依据,同时为人类辅助生殖技术水平的提升提供参考。获得的研究结果如下:1、通过碱(NaOH)和超声波分别预处理精子,得到精了头,进行ICSI操作。NaOH处理组的ICSI胚胎卵裂率、囊胚率(41.0%vs29.4%,31.7%vs14.5%)均显著地高于超声波处理组。2、显微注射机械制动精子和NaOH处理后的精子头,制动精子处理组的卵裂率显著地高于精子头处理组(51.2%vs38.0%),但囊胚率(20.9%vs27.6%)差异不显著。3、对卵母细胞显微注射精子尾和空注,精子尾处理组的卵裂率显著地低于空注组和孤雌组(12.0%vs49.7%vs55.]%),但囊胚率却显著地高于空注组和孤雌组(66.7%vs51.2%vs55.5%)。空注组和孤雌激活组的卵裂率(49.7%vs55.1%)、囊胚率.(51.2%vs55.5)之间没有显著差异。4、通过差异染色统计囊胚细胞数,利用制动精子、经NaOH处理后的精子头得到的ICSI囊胚相比,其总细胞数(87.16vs89.43)和ICM/T值(0.21vs0.22)之间差异不显著。5、分别移植利用制动精子得到的ICSI囊胚和利用NaOH处理后的精子头得到的ICSI囊胚,妊娠率分别为33.33%、35.71%,差异不显著。综上所述,使用NaOH处理精子可以提高牛ICSI效率,利川制动精子进行显微注射可以获得较高的ICSI胚胎发育率,但是与利用NaOH处理精子进行显微注射相比,已发育囊胚的质量和移植妊娠率没有显著差异。精子尾部对ICSI卵的发育没有有利影响,在ICSI操作的过程,机械损伤对卵的发育没有显著影响。