目的：　　探讨共刺激通路CD28-B7和CD40-CD40L在兔高风险角膜移植中的作用，通过利用第二代DNA测序技术，在基因水平探讨联合阻断共刺激信号对移植免疫排斥的影响和机制。　　方法：　　1.制作动物模型：选择新西兰大耳白兔60只，40只为受体兔用于模型制作，20只为角膜移植供体兔。将乌拉坦(3-4ml/kg体重)通过耳缘静脉注射对兔进行全身麻醉，再用0.4％盐酸奥布卡因滴眼液对右眼表面麻醉，麻醉完成后，用0/5缝线在偏角膜中央区均匀缝合4针，板层，针距约5mm。2周后，新生血管形成，均长入中央即可作为高风险受体进行角膜移植，在拆除缝线2-4天后进行穿透性角膜移植手术。　　2.实验动物分组：术后的实验动物随机分成对照组、MR1、抗B7组、联合用药组4组，每组10只。在移植当天至术后第5天各组分别做结膜下注射，其中对照组:注射生理盐水；MR1组：注射抗CD40L单克隆抗体(MR1抗体)100μg/d；抗B7组：注射抗B7抗体100μg/d；联合用药组：注射MR1抗体和抗 B7抗体,各100μg/d。　　3.于术后4周（28天）或免疫排斥反应发生时取各组角膜，用Illumina Solexa测序仪进行基因谱测定及分析，以比较各组排斥反应的严重程度和治疗效果的不同。　　结果:　　1.MR1组、抗 B7组和联合用药组均比对照组获得了较长的角膜存活时间（P<0.05），能够诱导角膜移植免疫耐受。联合阻断组存活时间(55.25±7.61)d，较其它3组明显延长（P<0.05）。MR1组和抗 B7组比较，差别无明显统计学意义(p>0.05)。　　2.基因测序分析表明：?MR1组与对照组标本相比差异表达的基因共有1463条。上调基因为741条，下调基因为722条；?抗 B7组标本与正常对照组标本相比差异表达的基因共有1367条。上调基因为618条，下调基因为749条；?联合用药组与正常对照组标本相比差异表达的基因共有1325条。上调基因为273条，下调基因为1052条。?联合用药组与MR1组标本相比差异表达的基因共有1527条。上调基因为230条，下调基因为1297条；…联合用药组与抗B7组标本相比差异表达的基因共有1739条。上调基因为166条，下调基因为1573条。基因上调意味着该基因实验组与对照组相比表达增强，基因下调与之相反。通过分析基因表达情况，可了解其中与免疫排斥相关的基因如IL-1α、IL-1β、ICAM-1、IL-2在联合用药组比单一用药组表达下降，IL-10基因在联合用药组比单一用药组表达升高，即抑制了促免疫排斥因子的表达，对角膜移植免疫排斥反应起抑制作用；而NF-κB、IFN-g基因未表现出有意义的改变。　　结论：　　应用抗B7抗体和CD40L单克隆抗体联合阻断CD28-B7和CD40-CD40L，角膜移植排斥反应明显减轻，比单独应用一种抗体提高了移植的存活率，延长植片的生存时间。