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2,5-二((2-(2,6-二甲基-2,6-二烯)壬基)-(2-甲基-3-羟基)-吡喃并(5-羟基)-异吲哚酮基)-戊酸(2,5-Bis-[8-(4,8-dimethyl-nona-3,7-dienyl)-5,7-dihydroxy-8-methyl-3-keto-1,2,7,8-tertahydro-6H-pyran[a]isoindol-2-yl]-p entanoic acid,FGFC1)是从海洋真菌长孢葡萄穗霉FG216(Stachybotrys longispora 216)的代谢产物中分离出的海洋天然产物,属于吡喃并异吲哚酮类生物碱。研究发现,在体外溶栓体系中,随着FGFC1浓度增加,对于纤维蛋白有明显的降解作用;在体外溶栓大鼠肺栓塞模型中,添加5mg/kg以上的FGFC1能使肺血栓彻底溶解,且FGFC1溶栓的安全性通过大鼠血液纤维蛋白原和FDP的含量不随FGFC1的加入而变化证实;通过对FGFC1产物进行优化,其发酵产量得到大幅度提升,是潜在的优良溶栓药物,故研究FGFC1促进血栓溶解的机理具有重要意义。本论文通过聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)及发色底物法研究FGFC1在单链尿激酶型纤溶酶原激活剂和纤溶酶原构成的相互活化反应体系中的作用,应用圆二色谱法(CD)研究FGFC1对纤溶活性因子空间结构的影响,运用发色底物法研究纤溶酶原激活剂激活纤溶酶原的酶促反应动力学,探究FGFC1对纤溶作用的促进机制。第一章总结了纤溶系统的组成部分纤溶酶原、纤溶酶原激活剂、纤溶酶原激活剂的抑制剂、纤溶酶抑制剂的分子结构及功能特性;阐述了圆二色谱法的作用机理及其在小分子与蛋白质相互作用的应用;总结了酶促动力学的相关理论基础及其在溶血栓药物机理探究中的相关方法及应用。第二章用聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)和发色底物法研究FGFC1在单链尿激酶型纤溶酶原激活剂和纤溶酶原构成的相互活化反应体系中的作用,从而探究FGFC1促进纤溶作用的机制。在体外构筑的纤溶反应体系中,SDS-PAGE的结果显示FGFC1的加入促进FITC-纤维蛋白原的降解,发色底物法结果证明加入FGFC1后体系中尿激酶及纤溶酶的含量增多,这些结果表明FGFC1加速纤溶酶原和单链尿激酶型纤溶酶原的相互活化作用。第三章应用圆二色谱法(CD)研究FGFC1对纤溶活性因子空间结构的影响。远紫外区的CD结果表明:FGFC1在23μmol·L-1~115μmol·L-1的浓度范围内,促使单链尿激酶型纤溶酶原激活剂的α-螺旋向无规卷曲转化,促使尿激酶型纤溶酶原激活剂的α-螺旋向无规卷曲转化,促使纤溶酶原的β-折叠向无规卷曲转化,促使纤溶酶的β-折叠向无规卷曲和β-转角转化,这些酶的二级结构的变化都导致酶分子柔性增加、更易发生反应;近紫外区的CD结果表明,FGFC1使纤溶酶原在285 nm处的摩尔旋光度增大。CD研究结果表明FGFC1对单链尿激酶型纤溶酶原激活剂和尿激酶型纤溶酶原激活剂结构的影响较为微弱,对纤溶酶及纤溶酶原结构的影响复杂而深刻。从CD的研究结果能够判断FGFC1作用于纤溶酶(原)并辅以改变单链尿激酶型纤溶酶原激活剂的二级结构发挥促进纤溶过程的作用。第四章运用发色底物法研究激活纤溶酶原的酶促反应动力学,在纤溶酶原激活剂激活纤溶酶原反应体系,随着FGFC1浓度的增加,Kcat的值显著增加,40μg·m L-1的FGFC1提高单链尿激酶型纤溶酶原激活剂激活纤溶酶原的Kcat增大26.5倍,这意味着FGFC1显著提高了单链尿激酶型纤溶酶原激活剂的最大催化效率;随着FGFC1浓度的增加,40μg·m L-1的FGFC1提高单链尿激酶型纤溶酶原激活剂激活纤溶酶原的kcat/km的增大了22.8倍,这表明FGFC1大大提高了单链尿激酶性纤溶酶原激活剂的总体催化活性。随FGFC1浓度的增大反应的Km值略有上升,这表明FGFC1较为微弱的降低了单链尿激酶性纤溶酶原激活剂对纤溶酶原的亲和活性。在纤溶酶原和单链尿激酶性纤溶酶原激活剂反应体系,单链尿激酶性纤溶酶原激活剂的活性中心与纤溶酶原的K5附近的Arg560-Val561相作用,单链尿激酶性纤溶酶原激活剂通过类似于尿激酶活性的内因性活性将纤溶酶原的Arg560-Val561断裂,FGFC1促进了单链尿激酶型纤溶酶原激活剂转化纤溶酶原的效率,从纤溶酶原的构象被FGFC1改变进而活性被提高的事实出发,我们能推测FGFC1改变K5附近的空间结构形成了纤溶酶原的Arg560-Val561周围肽段更加吻合单链尿激酶型纤溶酶原激活剂的活性中心。