【摘 要】
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肿瘤免疫治疗旨在激发机体的细胞免疫和体液免疫反应,依靠自身的免疫机制来获得有效的肿瘤治疗。肿瘤疫苗是肿瘤免疫治疗的研究热点之一,是采用载体负载肿瘤特异性抗原,并注射到体内从而发挥治疗作用的一种免疫治疗方法。游离的肿瘤抗原免疫效果差,细胞吞噬少,易被机体内酶降解等缺点。载体能有效保护抗原免受降解,且因载体本身具有的一些特性,可以刺激机体特异性免疫应答的发生。本文通过构建实心Si O2(sphere-
【基金项目】
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国家自然科学基金(81972899,21604095,21576068); 河北省自然科学基金(B2016202027); 天津市市自然科学基金(16JCYBJC19800,18JCQNJC14500); 天津市政府高技术领导与团队专项计划;
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肿瘤免疫治疗旨在激发机体的细胞免疫和体液免疫反应,依靠自身的免疫机制来获得有效的肿瘤治疗。肿瘤疫苗是肿瘤免疫治疗的研究热点之一,是采用载体负载肿瘤特异性抗原,并注射到体内从而发挥治疗作用的一种免疫治疗方法。游离的肿瘤抗原免疫效果差,细胞吞噬少,易被机体内酶降解等缺点。载体能有效保护抗原免受降解,且因载体本身具有的一些特性,可以刺激机体特异性免疫应答的发生。本文通过构建实心Si O2(sphere-Si O2,sSiO2)、花状结构Si O2(flower-Si O2,fSiO2)以及包裹fSiO2的Ca CO3微米粒(fSiO2loaded in Ca CO3microparticles,NM)三种纳米微米颗粒。三种颗粒均能有效提高抗原提呈细胞对抗原的吞噬、能促进树突状细胞的成熟和活化,及刺激细胞免疫反应的发生,在黑色素瘤模型中起到了一定的疗效。本文通过扫描电镜(SEM)、透射电镜(TEM)、激光粒度仪(DLS)、红外、表面Zeta电位、能量色散X射线光谱等对载体进行表征。通过BCA法测定载体对抗原的负载量。通过CCK8评价肿瘤疫苗对抗原提呈细胞的毒性、采用流式细胞仪(FACS)分析树突状细胞对肿瘤疫苗的胞吞量及胞吞路径、以及肿瘤疫苗刺激活化树突状细胞的水平。采用激光共聚焦显微镜(CLSM)观察肿瘤疫苗在树突状细胞内的分布情况及抗原溶酶体逃逸情况。采用小动物活体成像实时观察肿瘤疫苗淋巴结迁移情况。最后,采用动物模型评价肿瘤疫苗对黑色素瘤的治疗效果:(1)球形氧化硅sSiO2粒径约320 nm,粒径均一,形貌良好。纳米粒表面具有活性基团,可通过修饰来负载抗原;BCA法测定的sSiO2抗原负载量可高达458 mg g-1support;细胞毒结果表明sSiO2生物相容性较好;相比于游离抗原,sSiO2可以显著促进细胞对抗原的吞噬,且能促进BMDCs的成熟和抗原交叉提呈。活体成像结果显示sSiO2可以保护抗原免受快速降解,延长抗原在体内的留存时间。H&E染色辅证了sSiO2的良好生物相容性。(2)花状结构氧化硅fSiO2粒径约328 nm,具有明显的花状结构。BET表面积和孔隙率分别为477.35 m2g-1和1.504 cm3g-1。其抗原负载量可高达630mg g-1support。流式细胞仪和共聚焦结果显示fSiO2可以促进细胞吞噬抗原。fSiO2也能提高抗原的交叉提呈,促进BMDCs的成熟活化。动物实验结果表明fSiO2有着优秀的抗肿瘤作用,能激发机体抗肿瘤免疫应答。(3)NM是粒径5μm左右的微米粒,其内包裹着fSiO2。通过EDS元素mapping可看出fSiO2均匀分布在NM中。流式细胞仪和共聚焦结果显示NM可促进抗原的吞噬。共聚焦结果显示NM能促进抗原溶酶体逃逸,进而能够刺激产生细胞免疫反应。NM能促进抗原的交叉提呈,生物相容性好,能保护抗原不被机体快速降解。动物实验结果表明NM能促进机体抗肿瘤免疫反应。
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