颅咽管瘤系最常见的一种先天性颅内肿瘤，由于位置深，紧邻颅内重要结构，治 疗困难，迄今没有公认为理想的治疗方法。80年代以来陆续有报道，以博莱霉素多次囊 内注射可在一个疗程治愈肿瘤且副作用极少，被认为有发展前途。但颅咽管瘤为良性肿 瘤，没有细胞株，没有体外模型或活体模型，迄今为止有关它的基础研究十分缺乏。基 于此，我们希望通过颅咽管瘤原代培养建立颅咽管瘤体外模型，并进行博莱霉素体外抑 瘤实验，开展博莱霉素囊内化疗、联合³²P囊内化放疗和传统³²P囊内放疗的对照治疗， 以鉴定博莱霉素对于颅咽管瘤的疗效。 目的检测博莱霉素治疗颅咽管瘤的实验与临床疗效，为临床应用博莱霉素提供理 论依据：通过分子生物学方法分析化疗前后囊液成分，以寻找博莱霉素抑制肿瘤的机 制。方法第一部分：选取新鲜颅咽管瘤手术组织及颅咽管瘤囊液沉淀细胞，分别经胶原 酶消化和经未加 FBS的培养基反复清洗，获得单细胞悬液，进行体外培养。分时段计 数，绘制生长曲线。选取生长良好的细胞在培养24小时后去除培养液，分别加入含不同 浓度博莱霉素的培养液继续培养，并分时段计数，绘制抑瘤曲线。选择各药物浓度组中 已培养144小时的细胞，按ATP荧光测定法测定各组抑瘤效果。第二部分：随机、单盲地 （病人不知何疗法）地将颅咽管瘤病人分成a组－博莱霉素囊内化疗、b组－博莱霉素和³²P 囊内化放疗以及C组³²P囊内放疗三组，通过立体定向手术，在瘤囊内置引流管，然后分 别予注入博莱霉素、博莱霉素加³²P和生理盐水加³²P，随访至少6个月以上，比较治疗 前、随访后肿瘤囊腔容积大小，并测定治疗前后病人血液生化、内分泌指标和备种体液 的乳酸脱氢酶（LD）及其同工酶，分析治疗对这些因素的影响。第三部分：收集a，b两 组患者治疗前后的肿瘤囊液、脑脊液和血清标本，提取总蛋自并定量，以Western blotting检测β-hcg和bcl-2抗原。取生长良好的颅咽管瘤体外细胞，以含5％活性碳／葡 聚糖处理的FBS的培养基培养24小时后，去培养液，按Trizol法提取总RNA，然后以Rt－ PCR法检测β-hcg和bcl-2抗原的mRNA。结果第一部分：所有颅咽管瘤囊液沉淀细胞存 活均未能超过72小时，新鲜颅咽管瘤组织共有4例培养成功。细胞生长曲线呈逐步下降 趋势。药敏实验发现，加药细胞数量迅速下降，下降幅度与药物浓度有关。ATP荧光测 定法证实，浓度为1mg／ml和0．1mg／ml的博莱霉素溶液有显著抑瘤作用，但0．01mg/ml组 耐药。第二部分：有14例病人完成了全疗程治疗，包括a组3人，b组6人，c组5人。随访 6个月后，a组2例多囊肿瘤的加药囊缩小了分别为99％和56．5%, 而未加药囊则成倍扩 大，单囊肿瘤缩小了53．9％；b组3例病人囊腔完全或接近完全消失，2例囊腔分别缩小了 78．3％和57．1%, 1例病人因治疗导致高血钠综合症，疗程结束即自动出院，后死亡；C组 1例囊腔较治疗前扩大了50％，其余囊腔有不同程度缩小，但无1例完全或接近完全消 失。统计分析似乎b组疗效优于c组。a组和b组均有不同程度发热，但可自行消退。b组 的副反应还包括低血钠综合症，嗜食性肥胖，脑梗塞。c组1例出现右眼动眼神经瘫，其 余患者无特殊副反应。所有患者治疗前后血常规、肝肾功能无明显改变，治疗前后3组 患者均有不同程度激素水平改变，囊液、脑脊液和血清LD电泳分析未发现该酶及其同工 酶谱变化与博莱霉素治疗有相关关系，各体液之间的LD值也无显著差异。第三部分：所 有a、b两组病人的肿瘤囊液、脑脊液和血清标本蛋白中，仅1例b组病人的两份不同肿瘤 囊液蛋白中检出了β-hoe抗原，且似乎治疗前条带浓于治疗后；另1例b组病人的两份不 同肿瘤囊液蛋白中检出有bcl-2抗原表达，但治疗后条带浓于治疗前。其他病人的囊液 2 第二军医大学 博士学位论文 蛋白、所有病人的血清、脑脊液蛋白均未检出以上两抗原。对所有4例体外培养的颅咽 管瘤细胞的总RNA进行Rt－PCR，均成功检测到p十 抗原的InRNA，但仅1例细胞检测到 bclZ抗原的InRNA。结论颅咽管瘤细胞可以在体外短期培养，其细胞数逐日下降，但可 稳定培养两周以上；博莱霉素在体外可明显抑制颅咽管瘤细胞生长，其抑制效应呈浓度 和时间依赖；ATP荧光测定法作为药敏测定敏感、