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目的:腹膜透析(peritoneal dialysis,PD)作为终末期肾脏疾病肾脏替代治疗的重要手段,具有方便、对心血管系统稳定性影响小等优点,全世界目前拥有大约13万的肾脏病患者接受腹膜透析治疗,但有近50％的患者在开始治疗后的5年内停止腹膜透析治疗,其中腹膜纤维化引起的腹膜超滤衰竭(ultra-filtration failure,UFF)是腹透患者退出的主要原因。腹膜纤维化是长期腹膜透析患者晚期的主要和常见并发症之一,长期反复发生的腹膜炎症和接触生物相容性差的腹透液是腹膜形态学和功能改变的主要原因。血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)在腹膜结构和功能的改变中起着非常重要的作用,有研究报道VEGF的上调参与了腹膜毛细血管的重塑。甘草酸二铵是中药甘草有效成分的第三代提取物,具有较强的抗炎、保护细胞膜的作用。已有研究证实甘草酸二铵有抗纤维化的作用,本研究探讨甘草酸二铵对腹膜透析大鼠腹膜纤维化的影响,并检测血液及透析液中VEGF的浓度了解其是否与大鼠腹膜纤维化相关,为今后的临床应用提供依据。
方法:将清洁级雄性SD大鼠随机分成正常对照组,不给采取干预措施;生理盐水组,每日腹腔注射0.9%氯化钠注射液20ml;模型组,每日腹腔注射4.25%腹膜透析液20ml,同时腹腔内注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)0.6mg/kg,3次/周;已酮可可碱治疗组,除与模型组相同处理外,每日加己酮可可碱6mg/kg腹腔注射;甘草酸二胺治疗组,除与模型组相同处理外,每日加甘草酸二铵10mg/kg腹腔注射。连续28天,于第30天行2h腹膜平衡实验测定腹膜功能,留取血液及腹膜透析液用ELISA法观察VEGF浓度,并留取壁层腹膜用光镜观察病理形态。采用SPSS13.0进行统计分析,实验结果以均数±标准差(x±SD)表示,组间比较用单因素方差分析,并使用最小显著差(LSD)法作均数间的两两比较,P＜0.05有统计学意义。
结果:
1.腹膜功能的改变
模型组、已酮可可碱治疗组、甘草酸二胺治疗组与空白对照组、生理盐水组比较超滤量及D4/D0均明显减少,而模型组与已酮可可碱治疗组、甘草酸二胺治疗组相比,超滤量及D4/D0明显减少(均P＜0.05);与对照组比较,模型组、已酮可可碱治疗组、甘草酸二胺治疗组Durea/Purea明显增加,而模型组与已酮可可碱治疗组、甘草酸二胺治疗组相比,Durea/Purea明显增加,已酮可可碱治疗组、甘草酸二胺治疗组与模型组比较Durea/Purea相近,无统计学意义(P＞0.05);
2.各组大鼠腹膜厚度测定
模型组、已酮可可碱治疗组、甘草酸二胺治疗组与空白对照组、生理盐水组比较腹膜厚度增加,差异有统计学意义(P＜0.05),空白对照组和生理盐水组比较无统计学意义(P＞0.05);已酮可可碱治疗组、甘草酸二胺治疗组与模型组比较腹膜厚度小,差异有统计学意义(P＜0.05);已酮可可碱治疗组和甘草酸二胺治疗组比较无统计学意义(P＞0.05)。
3.腹膜组织学改变
光镜下,HE染色可见空白对照组和生理盐水组腹膜表面覆盖着一层扁平间皮细胞,模型组、已酮可可碱治疗组和甘草酸二胺治疗组显示腹膜间皮细胞变形成为柱形、圆形,间皮细胞可见部分脱落,间皮下基质增厚明显,发现大量成纤维样细胞及巨噬、单核细胞浸润,且有纤维素样物质沉积。上述现象在模型组表现最明显。Masson染色显示有明显的胶原沉积,模型组比已酮可可碱治疗组和甘草酸二胺治疗组胶原沉积更明显。
4.ELISA法测定血清及腹透液中的VEGF
VEGF表达结果:血清中的VEGF水平各组间比较未见显著差异(P＞0.05);腹透液中VEGF在空白对照组和生理盐水组比较无统计学意义(P＞0.05);模型组腹透液中VEGF水平高于已酮可可碱治疗组和甘草酸二胺治疗组比较均有统计学意义(P＜0.05),三组较空白对照组、生理盐水组比较均有升高,差异有统计学意义(P＜0.05)。
结论:
1.4.25%腹透液会使大鼠腹膜纤维化,腹膜透析液中VEGF表达上调。
2.甘草酸二胺可以减轻腹膜的纤维化,减少腹膜结构和功能的恶化。
3.甘草酸二胺减轻腹膜纤维化的作用有可能是通过下调VEGF表达而改善腹膜功能。