军团菌(legionella)是一种革兰氏阴性杆菌,广泛存在于自然环境和人工环境的水体、土壤中,可以通过含菌气溶胶的方式在空气中播散而被人体吸入导致人类感染,发生军团病。目前已发现作为军团菌肺炎(legionella pneumonia)病原体的军团菌属有42个种、64个血清型,其中至少有19个种与人类疾病有关,与人类疾病关系最密切的为嗜肺军团菌种(legionella pniumophila),已发现15个血清型。最近研究表明,在严重的社会获得性肺炎中,嗜肺军团菌为第二位病因,据统计军团病临床病例中由嗜肺军团菌所引起的病例占军团菌病的80%以上。军团菌可以污染社区内的水体,如自来水、空调系统冷却塔水、水井饮用水、洗浴用水等。目前尚未见到对自然环境、生活环境等各主要水体进行军团菌分布规律的系统研究。随着经济的发展和人民生活水平的提高以及国家采取大力发展第三产业的政策,中高层建筑迅速增加并普遍采用中央空调。而中央空调及建筑物相对封闭的内部环境都是引起军团病爆发的重要因素,并严重危害建筑物内人群身体健康。另外,环境中军团菌的广泛存在也有可能造成其他水体如喷泉、分体空调冷凝水等的污染。因此,急需建立一种快速、准确、简便的检验方法并对各种水体中嗜肺军团菌的时间、空间分布进行调查研究,为预防和控制军团菌传播提供科学依据。本研究对常规细菌培养方法的优化、常规PCR方法的优化、半套式PCR技术、简并随机引物扩增DNA多态性、扩增片段长度多态性、微卫星DNA多态性等分子鉴定技术在嗜肺军团菌鉴定及分型上的应用进行了比较深入的研究,分析对比了以上几种技术方法的优缺点,并根据环境大规模调查方法要求操作简便、费用较低、达到一定的敏感度和特异性的特点,选定用GVP培养基(加入万古霉素和多粘菌素B)对水样进行初次接种培养,如有阳性菌落再分别转种BCYE培养基培养。如在第2次培养阳性,挑取菌落进行PCR鉴定和血清学鉴定这一系列方法作为本次军团菌调查研究的鉴定方法,其特点是最大程度地降低交叉污染的机率和假阳性率。本研究以天津市城乡各种水体为研究对象进行采样检测,以求得到军团菌分布的空间和时间特点,掌握其分布规律,为进一步开展预防和控制军团菌病的措施研究打下基础。本研究在一年内连续采样,共设监测点138个,采集了444份水样,经检测其中军团菌阳性水样28份,嗜肺军团菌阳性水样25份,并对其中分离出的军团菌的种群进行了分型鉴定研究。研究发现自然水体、空调冷却水的监测点军团菌检出率分别为33.33%、27.78%;嗜肺军团菌阳性率分别达到28.6%和27.78%;另外,尚有PCR鉴定阳性、血清学鉴定阴性水样11份,PCR阴性、血清学鉴定阳性水样2份。而且在加湿器、淋浴喷头及人工喷泉等与人群生活密切相关水体中均有检出,提示嗜肺军团菌分布广泛,应尽快采取预防与控制措施以保护人群身心健康。1983年引滦入津作为天津市的饮用水源,改变了以前天津市一直以苦咸的海河水作为饮用水源的状况。但随着工农业生产的发展和人民生活水平的提高,引滦河道沿岸的生产企业通过排污、倒虹闸的泄漏使生活污水和工业废水进入河道内,引滦河水质也受到污染。如曾于1995年12月底至1996年1月19日发生宝坻县境内的窝头河倒虹管的损坏、污水渗入明渠河道及1998年12月至1999年1月发生秦庄子泵站污水泄漏事故。引滦入津二十年来对自尔王庄水库至宜兴埠泵站的26Km引滦河道定期进行水质常规检验的结果表明:生物污染较重(总大肠菌群达238000个/L),超过《生活饮用水源水质标准》(CJ3020-93)一级水源水标准的要求。鉴于此,本研究根据引滦河道的排污情况、河道的交叉情况及倒虹闸的分布情况确定采样点。采集水样以测定病原生物(包括细菌总数、总大肠菌群、粪大肠菌群、致病菌、f2噬菌体、隐孢子虫),并分析病原生物在河道各段的分布及变化规律,以便为制定引滦河水保护措施提供科学依据,所获结果如下:于桥水库至尔王庄水库段(明渠)的主要污染来源为沿途工业污水及生活污水的排污、涝水通过闸的泄漏。从时间变化趋势来看,细菌总数、总大肠菌群、粪大肠菌群、f2噬菌体在夏秋季较高,隐孢子虫除1-3月外,其他月份均有检出。从空间变化趋势来看,从于桥水库至尔王庄水库段均有生物污染现象,在洇流大桥和九王庄闸下两测点污染较严重。下游的尔王庄水库和宜兴埠泵站污染较轻。总大肠菌群超过《生活饮用水水源水质标准》(CJ3020-1993)对一级水质的要求,点次超标率为47.6%,水质较差。提出了切实可行的控制措施,为政府部门制定引滦水源保护措施提供科学依据,有的建议已经成为政府行为开始实施。预计这些建议被采纳并完成实施,必将产生巨大的社会效益、潜在的经济效益和一定的学术影响。