STC-1在新生奶牛胃肠道中的定位和定量表达

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Stanniocalcin-1(STC-1)是一种重要的Ca2+调控类糖蛋白激素,由硬骨鱼类所特有的斯坦氏小体分泌到血清中,后来陆续在多种动物和人体内发现了这种蛋白。STC-1参与钙磷代谢,它能抑制钙离子的吸收和促进磷离子的吸收及重吸收,维持血清中正常钙离子浓度,并进一步抑制磷酸盐的排泄。虽然STC-1广泛表达于哺乳动物中,但是其机理仍不清楚。从组织水平和分子层面上进一步研究STC-1在奶牛体内的表达和分布,对研究奶牛钙磷代谢具有重要意义,同时也为防制奶牛的钙磷代谢紊乱疾病提供新的路径。关于STC-1在奶牛中的研究多集中于奶牛妊娠期和哺乳期卵巢、血液和肾脏中STC-1的表达和功能,而STC-1在奶牛胃肠道中的表达研究不多,至今未见相关文献报道。STC-1是调节钙磷代谢的重要因子,在肾脏中具有调节钙磷排泄和重吸收的作用。初生奶牛是奶牛新陈代谢和生长最旺盛的时期,也是钙和磷的吸收和骨骼发育的重要时期。本论文旨在于研究STC-1在初生奶牛胃肠道中的分布规律,为进一步研究STC-1在消化系统中的钙磷吸收作用提供实验依据。本实验选取1日龄新生荷斯坦奶牛,运用原位杂交技术和免疫组化技术从基因水平和蛋白水平上,对STC-1基因和蛋白在奶牛胃肠道壁的分布进行了研究。原位杂交的结果表明,瘤胃固有层中有点状棕黄色反应;网胃的黏膜上皮边缘、瓣胃黏膜上皮与固有层的交界处、皱胃胃小凹和胃底腺可见颗粒状棕黄色染色;空肠黏膜上皮吸收细胞、肠腺以及回肠黏膜上皮细胞的杂交信号较弱;盲肠黏膜上皮和杯状细胞周围有棕黄色反应;结肠黏膜上皮边缘吸收细胞可见棕黄色染色。免疫组化的结果显示瘤胃、网胃、瓣胃黏膜层中呈弥漫性黄色染色,染色靠近固有层逐渐变浅;皱胃黏膜上皮细胞、胃小凹和胃腺,空肠上皮吸收细胞、肠腺分泌细胞处可见有明显的斑块状棕黄色染色;回肠黏膜上皮细胞边缘、盲肠黏膜上皮细胞、肠腺以及结肠黏膜上皮吸收细胞中有明显的棕黄色颗粒状染色。ELISA结果显示,STC-1在奶牛胃肠道中是以10-7pg级存在的,其中瓣胃中和回肠中STC-1蛋白含量较高,占上清可溶蛋白的24.72×10-7%和23.53×10-7%;网胃中STC-1蛋白含量最低,为13.24×10-7%;其他胃肠道中STC-1蛋白含量差异不大。运用荧光定量技术证实STC-1mRNA在奶牛胃肠道壁中广泛存在,其中十二指肠和结肠中STC-1mRNA的表达量相对较高,分别是肾脏STC-1mRNA表达量的85%和78%;空肠、回肠、盲肠中STC-1mRNA的表达量水平差距不大;在奶牛的四个胃中,瓣胃中STC-1mRNA的表达量较高,是肾脏的49%;皱胃中STC-1mRNA的表达量最低,是肾脏的17%。本实验证实了中华荷斯坦奶牛胃肠道中有STC-1基因和蛋白的表达,为STC-1在反刍动物中的组织表达分布和功能分析提供了实验依据,也为进一步研究STC-1在胃肠道中的生理作用如钙磷代谢和脂肪酸吸收等提供新的资料。
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