前言:卵巢癌是目前死亡率最高的女性生殖器肿瘤，其原因与卵巢癌对化疗药物的耐药性直接相关。近年来细胞粘附介导的耐药(cell adhesion mediated drugresistance，CAM-DR)受到广泛的关注。整合素作为粘附分子介导细胞粘附影响细胞凋亡产生CAM-DR已得到公认。细胞表面粘附分子可被糖基化修饰，而糖基化修饰会影响CAM-DR。糖基的改变主要是由催化糖基生成的糖基转移酶的活性及其底物的量来决定的。　　 Lewisy抗原是一种卵巢癌相关抗原，该结构中岩藻糖基由α1，2-岩藻糖转移酶催化形成。我们在前期工作中利用基因转染技术将人的α1，2-FT(H)基因转入卵巢癌细胞系RMG-1，建立Lewisy抗原高表达细胞系RMG-1-hFUT，结果表明基因转染后细胞系恶性生物学行为增加，对5-氟脲嘧啶(5-fluorouracil，5-FU)、卡铂、紫杉醇等的耐药性增强。我们的结果还证明基因转染导致整合素α5β1和整合素αvβ3表达增加，Lewisy参与整合素α5β1和整合素αvβ3(投稿中)的构成；并且细胞与纤维粘连蛋白(FN)、玻璃粘连蛋白(VN)粘附后，细胞粘附、转移能力明显增强，这些生物学行为的改变与Lewisy抗原相关(结果待发表)。我们推论Lewisy抗原在整合素α5β1及αvβ3介导细胞粘附耐药中起着重要的作用。　　 我们在前期研究的基础上，以转染α1，2-岩藻糖转移酶基因前后的卵巢癌细胞株RMG-1和RMG-1-hFUT为研究对象，以整合素αvβ3-VN介导的细胞粘附为体外实验模型，探讨Lewisy抗原在卵巢癌细胞粘附耐药中的作用和相关机制。本论文共分两部分。第一部分研究Lewisy抗原在玻璃粘连蛋白介导的细胞粘附耐药中的作用；第二部分探讨Lewisy抗原对卵巢癌细胞粘附耐药相关的信号分子的影响。　　 方法:　　 第一部分　　 采用基因转染技术将人的α1，2-岩藻糖转移酶(α1，2-fucosyltransferase，α1，2-FT)基因转入卵巢癌细胞系RMG-1，建立Lewisy抗原高表达细胞系RMG-1-hFUT，构建玻璃粘连蛋白介导的细胞粘附模型，将细胞暴露于不同剂量卡铂，MTT法检测细胞的生长抑制率，Hoechst33258荧光染色及流式细胞仪检测细胞凋亡情况，再利用抗Lewisy抗体，整合素αv抗体和整合素β3抗体进行阻断，流式细胞仪检测细胞相对凋亡坏死率的变化。　　 第二部分　　 在整合素αvβ3-VN介导的细胞粘附模型上，采用免疫细胞化学、western blot检测FUT1基因转染前后细胞耐药相关蛋白，Bcl-2蛋白和Topo-Ⅰ、Topo-Ⅱα、Topo-Ⅱβ蛋白的表达。利用抗Lewisy抗体，抗整合素αv抗体和抗整合素β3抗体进行阻断，再用免疫细胞化学、Western blot检测耐药相关蛋白表达的变化。　　 结果:　　 第一部分　　 1、RMG-1组、VN-RMG-1组、RMG-1-hFUT组和VN-RMG-1-hFUT组细胞的生长抑制率(IR)随着卡铂浓度的增加而升高；　　 2、VN-RMG-1-hFUT组的IR值明显低于RMG-1-hFUT组；　　 3、VN-RMG-1组与RMG-1组生长抑制率无显著差异；　　 4、VN-RMG-1-hFUT组对应IR值明显低于VN-RMG-1组；　　 5、RMG-1和RMG-1-hFUT细胞与VN粘附后细胞相对凋亡坏死率较粘附前明显下降。　　 6、四组细胞相对凋亡坏死率由高到低依次为：RMG-1、VN-RMG-1、RMG-1-hFUT、VN-RMG-1-hFUT。　　 7、抗Lewisy抗体、抗整合素αv抗体、抗整合素β3抗体阻断四组细胞，RMG-1-hFUT组、VN-RMG-1-hFUT组细胞相对凋亡坏死率均明显增高，但RMG-1组和VN-RMG-1组细胞相对凋亡坏死率无明显变化，而VN-RMG-1组的相对凋亡坏死率仍较RMG-1组低。　　 8、影响细胞凋亡率下降程度由高到低依次为抗Lewisy抗体，抗整合素αv抗体，抗整合素β3。　　 第二部分　　 1、Topo-Ⅱα表达在四组中均无明显变化。　　 2、Topo-Ⅰ、Topo-Ⅱβ在RMG-1-hFUT组中的表达均比RMG-1组高。　　 3、Topo-Ⅰ在RMG-1组和VN-RMG-1组、RMG-1-hFUT组和VN-RMG-1-hFUT组表达均无明显变化。　　 4、Topo-Ⅱβ在RMG-1组和VN-RMG-1组中表达无明显变化，在VN-RMG-1-hFUT组中表达较RMG-1-hFUT组增高。　　 5、Bcl-2在四组细胞中的表达由低到高依次为RMG-1组、VN-RMG-1组、RMG-1-hFUT组、VN-RMG-1-hFUT组。　　 6、分别采用抗Lewisy抗体、抗整合素αv抗体、抗整合素β3抗体处理后，Topo-Ⅱβ和Bcl-2蛋白表达均有不同程度下降，其中以抗Lewisy抗体处理后下降明显。　　 7、影响Topo-Ⅱβ和Bcl-2蛋白表达的抗体由高到低依次为抗Lewisy抗体、抗整合素αv、抗整合素β3。　　 结论:在整合素αvβ3-玻璃粘连蛋白介导的细胞粘附中，Lewisy抗原抑制细胞凋亡，对细胞粘附耐药起重要作用；Lewisy抗原促进Topo-Ⅰ、Topo-Ⅱβ和Bcl-2蛋白的表达，在整合素αvβ3-玻璃粘连蛋白介导的细胞粘附中，Lewisy抗原进一步促进Topo-Ⅱβ和Bcl-2的表达。